自噬對(duì)鎘致大鼠腎小管上皮細(xì)胞凋亡的影響及其調(diào)控機(jī)制.pdf

1、埸H1大譬YANGZH0UUNIVERSITY學(xué)號(hào)密級(jí)博士學(xué)位論文自噬對(duì)鎘致大鼠腎小管上皮細(xì)胞凋亡的影響及其調(diào)控機(jī)制劉剛指導(dǎo)教師姓名：型室鏨蕉：塹叢盤莖：婆菱塹叢：至2三QQ里申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：監(jiān)一學(xué)科專業(yè)名稱：堅(jiān)鏖簦匡莖論文提交日期：2Q12生壘旦。論文答辯日期：2Q!Z生魚旦學(xué)位授予單位：塹劌盤芏學(xué)位授予日期：2Q!Z主魚旦答辯委員會(huì)主席：工壁受塞旦2017年6月劉剛：自噬對(duì)鎘致大鼠腎小管上皮細(xì)胞凋亡的影響及其調(diào)控機(jī)制自噬對(duì)鎘致大鼠腎小

2、管上皮細(xì)胞凋亡的影響及其調(diào)控機(jī)制中文摘要鎘是環(huán)境中常見的高毒性重金屬污染物，急性或慢性鎘暴露能引起多種器官和組織的損傷。近年來，由于工業(yè)生產(chǎn)中鎘生產(chǎn)量和使用量的激增及相關(guān)工業(yè)廢物帶來的污染加重，使得環(huán)境中鎘含量呈快速上升趨勢(shì)；鎘在環(huán)境中的半衰期長(zhǎng)達(dá)lo30年，進(jìn)入環(huán)境后不能像有機(jī)污染物一樣被微生物降解，并且可以通過食物鏈效應(yīng)最終蓄積在人體中。因此，鎘暴露給公眾健康帶來的危害引起了廣泛關(guān)注。腎臟是鎘毒性作用的靶器官，國(guó)內(nèi)外學(xué)者從環(huán)境污染、

3、職業(yè)性暴露和動(dòng)物試驗(yàn)等多等方面對(duì)鎘所致腎毒性機(jī)理進(jìn)行了廣泛、深入地研究；但這些研究多集中于凋亡機(jī)理的探究，而對(duì)鎘所致腎臟毒性過程中自噬的機(jī)理、作用及其與凋亡關(guān)系的探究較少。1鎘誘導(dǎo)大鼠腎臟皮質(zhì)和腎小管上皮細(xì)胞發(fā)生自噬分為體外和體內(nèi)兩部分。體外試驗(yàn)采用機(jī)械篩網(wǎng)結(jié)合酶消化法建立原代大鼠腎小管上皮細(xì)胞(rPTcells)培養(yǎng)模型，在傳一代細(xì)胞增殖活性最強(qiáng)時(shí)問進(jìn)行鎘染毒處理，同時(shí)選擇NRK52E細(xì)胞株進(jìn)行同樣處理。CCK一8法測(cè)定不同濃度的鎘在

4、不同染毒時(shí)間對(duì)rPT細(xì)胞和NRK52E細(xì)胞活性的影響；MDC熒光探針法檢測(cè)不同濃度的鎘在不同染毒時(shí)間對(duì)rPT細(xì)胞和NRK52E細(xì)胞自噬水平的影響；25pM和5pM鎘處理rpT細(xì)胞、5uM和10gM鎘處理NRK52E細(xì)胞6h，免疫印跡法檢測(cè)自噬相關(guān)蛋白LC3II、p62和Beclin一1表達(dá)水平變化。結(jié)果表明，25gM和5gM鎘處理rPT細(xì)胞、5gM和10gM鎘處理NRK52E細(xì)胞6h，細(xì)胞活性最強(qiáng)，自噬水平最高，極顯著高于對(duì)照組(火00

5、1)；25gM和5gM鎘處理rPT細(xì)胞、5uM和10taM鎘處理NRK52E細(xì)胞12h，細(xì)胞自噬水平最低，極顯著低于對(duì)照組(P001)。體內(nèi)試驗(yàn)選擇SD大鼠32只，隨機(jī)分為4組：對(duì)照組(DDW)和鎘組(CdAc2，50mg／kgbw)，飼養(yǎng)l周；對(duì)照組(DDW)和鎘組(CdAc2，50mg／kgbw)，飼養(yǎng)8周。取腎臟皮質(zhì)，RTPCR法檢測(cè)自噬相關(guān)基因LC3、p62和Beclin1表達(dá)量變化；免疫印跡法檢測(cè)自噬相關(guān)蛋白LC3II、p62