大黃素調(diào)節(jié)腎小管上皮細(xì)胞自噬的作用及分子機(jī)制.pdf

1、目的：自噬(autophagy)是真核細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)和細(xì)胞器的自我降解過(guò)程，它在維持細(xì)胞內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)中起重要作用。在某些條件下，自噬的異常可能會(huì)誘發(fā)或加重腎臟疾病，因此調(diào)控自噬可能成為治療腎臟病的新途徑。而大黃素作為大黃的主要成分之一，在腎臟疾病的治療中發(fā)揮重要作用。本研究通過(guò)建立腎小管上皮細(xì)胞自噬的模型，探討大黃素在體外調(diào)節(jié)自噬的作用及其機(jī)制，以期為大黃素在腎臟病領(lǐng)域的應(yīng)用提供新的方向。
　　方法：包括文獻(xiàn)研究和實(shí)驗(yàn)研究。第一部分文

2、獻(xiàn)研究，綜述了大黃素治療腎臟病研究概況和自噬在腎臟病研究概況;第二部分實(shí)驗(yàn)研究，首先，運(yùn)用Western blot檢測(cè)大黃素對(duì)Hank's平衡鹽溶液(Hank's balanced salt solution，HBSS)饑餓誘導(dǎo)的細(xì)胞自噬標(biāo)志性蛋白——哺乳動(dòng)物同族物微管相關(guān)蛋白1輕鏈3(microtubule-associated protein1 light chain3，LC3)Ⅰ/Ⅱ表達(dá)水平的影響;用紅色熒光蛋白-微管相關(guān)蛋白1輕

3、鏈3(redfluorescentprotein-microtubule associated protein light chain3，RFP-LC3)質(zhì)粒瞬時(shí)轉(zhuǎn)染NRK-52E細(xì)胞，以HBSS(1mL)聯(lián)合巴弗洛霉素A1(10nmol·L-1)處理，予大黃素(10μmol·L-1)干預(yù)后，熒光顯微鏡下觀察RFP-LC3熒光顆粒的變化。然后，以哺乳動(dòng)物類(lèi)雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin，mTO

4、R)抑制劑雷帕霉素（100 nmol·L-1）干預(yù)，觀察阻斷mTOR信號(hào)通路對(duì)大黃素抑制細(xì)胞自噬作用的影響。最后，通過(guò)誘導(dǎo)內(nèi)源性mTOR抑制蛋白DEPTOR(DEP domain-containing mTOR-interacting protein)過(guò)表達(dá)，進(jìn)一步檢測(cè)mTOR信號(hào)通路對(duì)大黃素抑制細(xì)胞自噬的影響。
　　結(jié)果：HBSS饑餓可誘導(dǎo)NRK-52E細(xì)胞LC3Ⅱ蛋白高表達(dá)，大黃素干預(yù)后可逆轉(zhuǎn)HBSS誘導(dǎo)的LC3Ⅱ蛋白表達(dá)增加