Stats激活對缺血-再灌注誘導(dǎo)近曲腎小管上皮細胞凋亡的影響及其細胞內(nèi)機制.pdf

1、背景及目的：急性腎衰竭(Acute rena1 failure，ARF)是常見的臨床綜合癥。近半個世紀以來，在住院病人、尤其是重癥監(jiān)護病人中，ARF病死率一直居高不下。ARF最主要的形式是急性腎小管壞死(acute tubular necrosis，ATN)，而凋亡是ATN時腎小管上皮細胞死亡的主要方式，是ATN治療的重要靶點。但目前對引起腎小管上皮細胞凋亡的分子機制尚不清楚。深入了解KIN時凋亡的細胞內(nèi)機制非常重要。Janus激酶一信

2、號傳導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄活化因子(Januskinase—signal transducers and activators of transcription，Jak-Stat)信號途徑可介導(dǎo)炎癥、增殖、凋亡、發(fā)育、腫瘤等過程，并受細胞因子信號傳導(dǎo)抑制因子(suppressors of cytokinesignaling，SOCS)負反饋調(diào)控。目前尚不清楚Jak-Stat-SOCS通路在ATN病理生理過程中的作用。本研究旨在探討Jak-Stat-

3、SOCS信號途徑是否參與缺血再灌注誘導(dǎo)ATN中的發(fā)病機制，試圖明確該途徑對缺血再灌注誘導(dǎo)的近曲腎小管上皮細胞凋亡的調(diào)控作用，以期尋找阻斷上皮細胞凋亡、改善ARF臨床預(yù)后的有效方法。 方法：制作缺血再灌注腎損傷的細胞模型，誘導(dǎo)體外培養(yǎng)的近曲腎小管上皮細胞凋亡。Western印跡、細胞免疫熒光染色檢測Statl,Stat3激活。使用特異性阻斷劑AG 490抑制酪氨酸激酶Jak2，或利用RNA干涉(RNA interference，R

4、NAi)技術(shù)分別基因敲低Statl和Stat3，通過流式細胞術(shù)檢測其對缺血再灌注誘導(dǎo)近曲腎小管上皮細胞凋亡的影響，判定Stat 1和Stat3激活在缺血再灌注誘導(dǎo)腎小管上皮細胞凋亡中的作用。應(yīng)用反轉(zhuǎn)錄一多聚酶鏈反應(yīng)(reversetranscription-p01ymerase chain reaction， RT-PCR)，Western印跡檢測Stats負反饋因子SOCS3是否被誘導(dǎo)表達，并利用RNAi技術(shù)基因敲低SOCS3，通過

5、Western印跡和流式細胞術(shù)觀察SOCS3敲低后對缺血再灌注誘導(dǎo)Statl，Stat3激活和上皮細胞凋亡的影響，探討Jak2-Stat 1／Sta3-SOCS3途徑激活在缺血再灌注誘導(dǎo)腎小管上皮細胞凋亡中的作用。最后穩(wěn)定轉(zhuǎn)染Stat3組成性激活質(zhì)粒，通過流式細胞術(shù)檢測Stat3組成性激活質(zhì)粒過表達對缺血再灌注誘導(dǎo)小管上皮細胞凋亡和線粒體膜電位的影響，以進一步明確Stat3激活的保護作用及機制。 結(jié)果：在體外成功模擬缺血再灌注誘

6、導(dǎo)腎小管上皮細胞凋亡模型，發(fā)現(xiàn)Statl，Stat3在小管上皮細胞凋亡過程中存在一過性激活。Jak2特異性抑制劑AG490預(yù)處理可阻斷Statl，Stat3激活并加重細胞凋亡。Statl基因敲低可明顯抑制缺血再灌注誘導(dǎo)的Statl激活和腎小管上皮細胞凋亡，對Stat3激活無影響；Stat3基因敲低可明顯抑制缺血再灌注誘導(dǎo)Stat3激活，加重腎小管上皮細胞凋亡，對Statl激活無影響。缺血再灌注可誘導(dǎo)腎小管上皮細胞SOCS3 mRNA和蛋

7、白表達增多。SOCS3基因敲低可使缺血再灌注誘導(dǎo)的腎小管上皮細胞Stat3激活增強，凋亡減少。Stat3C過表達可抑制缺血再灌注誘導(dǎo)的腎小管上皮細胞線粒體膜電位下降和細胞凋亡，并上調(diào)抗凋亡蛋白Bc1-2表達。 結(jié)論：缺血再灌注可誘導(dǎo)近曲腎小管上皮細胞Jak2介導(dǎo)的Statl和Stat3激活，Statl和Stat3激活在缺血再灌注誘導(dǎo)的腎小管上皮細胞凋亡中作用相反，Statl激活可促進凋亡，而Stat3激活可抑制細胞凋亡。缺血再灌