脛骨癌痛大鼠脊髓水平細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)蛋白激酶5的表達(dá)及其作用.pdf

1、目的：探討脊髓水平細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)蛋白激酶5(ERK5)在骨癌痛大鼠中的表達(dá)及其作用。
　　方法：采用大鼠脛骨癌痛模型。選擇雌性SD大鼠，體重160g-180g。實(shí)驗(yàn)一:56只大鼠采用隨機(jī)數(shù)字表法將其分為7組(n=8):對(duì)照組（C組）、假手術(shù)組(S組)和骨癌痛3天組(BCP3組)、骨癌痛5天組(BCP5組)、骨癌痛7天組(BCP7組)、骨癌痛14天組(BCP14組)、骨癌痛21天組(BCP21組)。分別于術(shù)前1d，術(shù)后1、3、5、7

2、、14和21d時(shí)，測(cè)定機(jī)械性刺激閾值及自由行走痛行為學(xué)評(píng)分。BCP各組大鼠脛骨骨髓腔內(nèi)注射Walker-256乳腺癌細(xì)胞混懸液，制備大鼠脛骨癌痛模型;S組大鼠脛骨骨髓腔內(nèi)注射等容量生理鹽水;C組大鼠不作任何處理。S組于接種后14d、模型組于接種后7d、14d和21d時(shí)行大鼠脛骨X線(xiàn)攝片觀察腫瘤誘發(fā)的骨破壞情況。采用Western-blot法檢測(cè)各組大鼠脊髓p-ERK5、ERK5及Fos蛋白表達(dá)。
　　實(shí)驗(yàn)二:雌性SD大鼠56只，隨

3、機(jī)分為7組(n=8)，假手術(shù)組（Ⅰ組），假手術(shù)+ BIX0218810μg/10μl（Ⅱ組）、骨癌痛組（Ⅲ組）、骨癌痛+溶媒DMSO組(Ⅳ組)、骨癌痛+ BIX021880.1μg/10μl組（Ⅴ組）、骨癌痛+BIX021881.0μg/10μl組（Ⅵ組）、骨癌痛+ BIX0218810μg/10μl組（Ⅶ組）。Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ組采用脛骨骨髓腔內(nèi)注射Walker-256乳腺癌細(xì)胞制備脛骨癌痛模型，Ⅰ、Ⅱ組骨髓腔內(nèi)注射等體積生理鹽水。Ⅰ

4、、Ⅲ組造模后不給予藥物處理，其余各組于造模后14天分別鞘內(nèi)注射DMSO（Ⅳ組）、BIX021880.1μg/10μl（Ⅴ組）、1.0μg/10μl(Ⅵ組)、BIX0218810μg/10μl（Ⅱ組、Ⅶ組）。行為學(xué)測(cè)定:各組隨機(jī)取8只大鼠，在術(shù)后第14d分別于給藥前、給藥后0.5、1、2、4、8、12、24h測(cè)定大鼠機(jī)械縮足反射閾值(MWT)。各組隨機(jī)取4只大鼠于鞘內(nèi)給藥后4h取脊髓L4-5節(jié)段，采用Western-blot法檢測(cè)脊髓水平

5、p-ERK5、ERK5及p-CREB蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果：實(shí)驗(yàn)一(1)C組和S組大鼠機(jī)械縮足反射閾值和行走痛行為學(xué)評(píng)分在術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)組內(nèi)比較差異無(wú)顯著性;與C組和S組相比，BCP組接種后7d、14d、21d時(shí)機(jī)械性刺激痛閾下降，其中第14d時(shí)MWT最低;而自由行走痛行為學(xué)評(píng)分逐漸升高。(2)與C組相比，術(shù)后5d、7d、14d、21d組脊髓水平p-ERK5表達(dá)上調(diào)(P＜0.05);同時(shí)脊髓Fos蛋白表達(dá)也上調(diào)，其變化趨勢(shì)與p-ERK

6、5的表達(dá)變化大致相同，但脊髓水平ERK5表達(dá)變化無(wú)顯著差異。(3)影像學(xué)表現(xiàn):造模后第14d、21d，骨癌痛大鼠接種側(cè)脛骨可見(jiàn)明顯的骨結(jié)構(gòu)破壞。
　　實(shí)驗(yàn)二(1)行為學(xué)結(jié)果:與Ⅰ組相比，鞘內(nèi)給予BIX02188對(duì)Sham組（Ⅱ組）MWT沒(méi)有影響，骨癌痛各組14 d時(shí)MWT顯著降低(P＜0.05)。與給藥前比較，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ組各時(shí)點(diǎn)MWT差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，Ⅵ組大鼠在給藥后1h時(shí)MWT開(kāi)始升高，在4h作用達(dá)到高峰

7、，持續(xù)至給藥后8h，Ⅶ組大鼠在給藥后0.5h時(shí)MWT開(kāi)始提高，至4h時(shí)作用達(dá)到高峰，持續(xù)至給藥后12h。與骨癌痛組（Ⅲ組）比較，Ⅵ組、Ⅶ組在給藥后1、2、4、8hMWT明顯升高，而Ⅳ組、Ⅴ組MWT無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　(2) Western-blot結(jié)果顯示:與Ⅰ組（sham組）相比，骨癌痛各組p-ERK5及p-CREB表達(dá)明顯升高(P＜0.05);與Ⅲ組相比，給藥后4h，Ⅵ、Ⅶ組p-ERK5和p-CREB表達(dá)明顯降低(P＜0.05

8、)，而Ⅳ、Ⅴ兩組，p-ERK5和p-CREB表達(dá)無(wú)顯著性差異。各組間ERK5表達(dá)無(wú)顯著差異。BIX02188對(duì)骨癌痛的抑制作用隨給藥劑量的增加而增強(qiáng)。
　　結(jié)論：1.脛骨癌痛大鼠脊髓水平p-ERK5表達(dá)明顯上調(diào);同時(shí)Fos蛋白表達(dá)也上調(diào)，其變化趨勢(shì)與p-ERK5的表達(dá)變化大致相同。2.鞘內(nèi)給予BIX02188可以減輕骨癌痛大鼠的機(jī)械痛覺(jué)過(guò)敏，作用高峰在給藥后4h，并能夠降低脊髓p-ERK5及p-CREB的表達(dá)，提示ERK5-CRE