丙烯酰胺對大鼠脊髓組織蛋白激酶的影響.pdf

1、丙烯酰胺(Acrylamide,ACR)是一種水溶性的、乙烯基單體,主要用于生產(chǎn)聚丙烯酰胺(polyacrylamide,PACR),后者可作為良好的凝結(jié)、增稠、吸水劑,廣泛用于廢水處理、采油、造紙、紡織、皮革、采礦、醫(yī)藥等行業(yè)。近年來隨著石油工業(yè)的迅速發(fā)展,丙烯酰胺需求量不斷增加。
　　 盡管動物實(shí)驗(yàn)顯示ACR有神經(jīng)毒性、致腫瘤毒性和生殖毒性,但只有神經(jīng)毒性是經(jīng)過職業(yè)暴露人群流行病學(xué)研究證實(shí)的。ACR神經(jīng)毒性主要表現(xiàn)為中樞-周

2、圍性遠(yuǎn)端軸索病,臨床表現(xiàn)為共濟(jì)失調(diào)、骨骼肌無力,其病理特征是遠(yuǎn)端軸突腫脹、變性、神經(jīng)絲(neurofilament,NF)聚集,但發(fā)病機(jī)理尚未完全闡明。我們通過建立ACR亞慢性中毒大鼠模型,測定大鼠脊髓中鈣調(diào)蛋白(calmodulin,CaM)、Ca2+/鈣調(diào)素依賴型蛋白激酶Ⅱ(Ca2+/CaM-dependent protein kinascⅡ,CamKII)、蛋白激酶A(proteinkinaseA,PKA)、環(huán)磷酸腺苷(3’-5’

3、-cyclicadenosine monophosphate,cAMP)、蛋白激酶C(proteinkinase C,KC)和周期蛋白依賴性的蛋白激酶5(cyclin dependent kinasc5,CDK5)以及CDK5相關(guān)因子p35含量,為ACR中毒神經(jīng)病發(fā)病機(jī)制研究提供資料,為ACR職業(yè)中毒的預(yù)防和治療提供可以借鑒的基礎(chǔ)資料。
　　 方法:
　　 1雄性成年健康Wistar大鼠,體重180-220g,ACR經(jīng)腹

4、腔注射染毒,染毒劑量分別為20、40mg/kg,連續(xù)8周(每周染毒3次),建立ACR亞慢性中毒神經(jīng)病動物模型。
　　 2分離脊髓組織,制備勻漿,高速離心。用SDS-PAGE和Western-Blotting方法測定胞漿蛋白中的PKA、PKC、CDK5以及p35的含量。用ELISA檢測試劑盒測定cAMP和CaM含量變化。
　　 3取大鼠脊髓組織胞漿蛋白,利用放射性同位素技術(shù)研究ACR染毒對大鼠脊髓中CaMKⅡ、PKA和PK

5、C活性的影響。
　　 結(jié)果
　　 1 ACR動物模型的建立:動物經(jīng)20、40 mg/kg ACR腹腔染毒后,體重增長減緩,步態(tài)得分增高；染毒終止時(shí),低、高劑量組分別呈輕度和重度受損步態(tài)。ACR亞慢中毒神經(jīng)病動物模型建立。
　　 2脊髓組織中蛋白激酶含量:
　　 1)CaM蛋白含量在ACR亞慢性中毒大鼠脊髓的胞漿蛋白中明顯降低,與對照組相比,20 mg/kg ACR染毒組降低了21％,40 mg/kg AC

6、R染毒組降低了17％,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。
　　 2)PKA和cAMP蛋白含量在ACR亞慢性中毒大鼠脊髓的胞漿蛋白中沒有明顯變化(P>0.05)。
　　 3)PKC蛋白含量在ACR亞慢性中毒大鼠脊髓組織的胞漿蛋白中明顯降低,與對照組相比,40mg/kg ACR染毒組降低了46％,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。與20mg/kg組相比,40mg/kgACR染毒組降低了41％,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)

7、。
　　 4)CDK5和p35蛋白含量在ACR亞慢性中毒大鼠脊髓組織的胞漿蛋白中明顯降低,與對照組相比,40mg/kg ACR染毒組CDK5和p35蛋白含量分別降低了23％和46％,差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。
　　 3脊髓組織中蛋白激酶活性
　　 1)CaMKⅡ蛋白活性在ACR亞慢性中毒大鼠脊髓組織的胞漿蛋白中明顯升高,與對照組相比,20mg/kg、40mg/kg ACR染毒組分別升高了123％和261

8、％,差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。
　　 2)PKA蛋白活性在ACR亞慢性中毒大鼠脊髓組織的胞漿蛋白中明顯升高,與對照組和20mg/kg染毒組相比,40mg/mg染毒組分別升高了57％和50％(p<0.01).差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 3)PKC活性在ACR亞慢性中毒大鼠脊髓組織的胞漿蛋白中明顯升高,與對照組相比,40mg/kg染毒組升高了170％,與20mg/kg染毒組相比,40mg/kg染毒組升高了160％(