季節(jié)變化對呼吸系統(tǒng)免疫調節(jié)機制影響的研究.pdf

1、本課題以“天人相應”理論和肺衛(wèi)理論為基礎，就季節(jié)變化對呼吸系統(tǒng)免疫物質的影響提出假設，以期驗證其與免疫物質的活動變化相關性，為臨床上常見的呼吸系統(tǒng)疾病季節(jié)性發(fā)病提供一定的實驗依據(jù)，同時在預防和保健領域亦具有重要的參考價值。
　　 本實驗內容主要包括以下三部分：
　　 第一部分：季節(jié)變化對健康大鼠肺組織IL-1β、IL-2、IL-6、IL-10和SP-A表達的影響目的：通過觀察季節(jié)變化過程中大鼠肺組織IL-1β、IL-2、

2、IL-6、IL-10和SP-A的表達，探討季節(jié)變化對大鼠肺臟免疫調節(jié)的作用機制，為呼吸系統(tǒng)季節(jié)性發(fā)病的病理生理機制的認識提供實驗依據(jù)。
　　 方法：清潔級健康3月齡雄性SD大鼠64只，體質量180-220克，分別按購買時間分為立春、春分、立夏、夏至、立秋、秋分、立冬、冬至8個組（n=8）。分別于節(jié)氣前14天購入實驗大鼠。自由攝取水及普通鼠全價顆粒飼料，室溫飼養(yǎng)，接受自然光照。飼養(yǎng)到相應節(jié)氣，于當日下午6時將動物斷頭處死，取出大鼠

3、全肺組織進行IL-1β、2、6、10和SP-AmRNA檢測。
　　 結果：
　　 2.季節(jié)變化對健康大鼠肺組織IL-1β表達的影響在正常生理狀態(tài)下，全年健康大鼠肺組織中IL-1βmRNA表達呈現(xiàn)出夏季較高，春秋冬季較低（立夏>春分>夏至>立春>立冬>冬至>立秋>秋分）的變化趨勢。半定量PCR結果顯示春分、立夏、夏至相對表達水平，較其他組均有顯著性升高（P<0.05或P<0.01）。秋冬季節(jié)各組間相互比較無顯著性差異（P>

4、0.05）。
　　 3.季節(jié)變化對健康大鼠肺組織IL-2表達的影響在正常生理狀態(tài)下，全年健康大鼠肺組織中IL-2mRNA表達呈現(xiàn)出春夏季較高，秋冬季較低（春分>夏至>立夏>立春>冬至>立秋>秋分>立冬）的變化趨勢。半定量PCR結果顯示與春分、立夏組和夏至組相對表達水平比較，其他組明顯降低（P<0.01）。秋冬季節(jié)各組間相互比較無顯著性差異（P>0.05）.
　　 4.季節(jié)變化對健康大鼠肺組織IL-6表達的影響在正常生理狀

5、態(tài)下，全年健康大鼠肺組織中IL-6mRNA表達呈現(xiàn)出夏季較高，冬季較低，春秋次之（夏至>立夏>立秋>立春>春分>秋分>立冬>冬至）的變化趨勢。半定量PCR結果顯示與立冬和冬至組比較，立春、春分、立夏、夏至和立秋組顯著性升高（P<0.05或P<0.01）；與夏至組比較，春分、秋分、立冬和冬至組顯著性降低（P<0.05或P<0.01）；與立秋組比較，秋分、立冬和冬至組顯著性升高（P<0.05）。
　　 5.季節(jié)變化對健康大鼠肺組織I

6、L-10表達的影響在正常生理狀態(tài)下，全年健康大鼠肺組織中IL-10mRNA表達呈現(xiàn)出夏秋季較高，冬春較低（夏至>秋分>立秋>立冬>立夏>春分>立春>冬至）的變化趨勢。半定量PCR結果顯示與夏至組比較，立春組和冬至組顯著性降低（P<0.05）。
　　 6.季節(jié)變化對健康大鼠肺組織SP-A表達的影響在正常生理狀態(tài)下，健康大鼠肺組織中SP-AmRNA在春夏季節(jié)明顯增加，秋冬季節(jié)中SP-AmRNA表達較少（夏至>春分>立夏>立春>立秋>

7、秋分>冬至>立冬）的變化趨勢。半定量PCR結果顯示與春分和夏至組比較，立秋、秋分、立冬和冬至組顯著性降低（P<0.05或P<0.01）；與立冬組比較，其他各組均顯著性升高（P<0.05或P<0.01）。
　　 結論：季節(jié)通過調節(jié)大鼠肺組織中IL-1β、2、6、10和SP-A的含量的變化來影響肺的免疫防御功能，其中IL-1β、2、6、10和SP-A可能是機體免疫功能季節(jié)性變化的中介物質基礎。肺部免疫防御功能大致存在春夏較高，秋冬季

8、低的季節(jié)節(jié)律，這可能是秋冬季節(jié)呼吸系統(tǒng)多發(fā)病的病理生理學基礎之一。
　　 第二部分：季節(jié)變化對健康大鼠血清Th1和Th2型細胞因子的調節(jié)作用及肺組織形態(tài)學的影響目的：本部分研究通過建立自然環(huán)境下大鼠動物模型，旨在通過觀察不同季節(jié)氣候條件下大鼠血清中Th1和Th2型細胞因子（IL-10和INF-γ）含量的變化以及肺組織形態(tài)學的改變，以期闡釋季節(jié)變化影響呼吸系統(tǒng)中Th1和Th2免疫平衡的調節(jié)作用及其機制，為指導臨床實踐提供一定的理論

9、依據(jù)。
　　 方法：動物分組及標本取得同第一部分。組織學觀察：動物斷頭后，迅速開胸取右肺中葉，用4％多聚甲醛固定，脫水、包埋、切片，蘇木精-伊紅HE染色，鏡下觀察形態(tài)學改變。IL-10和IFN-γ水平的檢測：大鼠血清離心后，取上清，采用雙抗體夾心ABC-ELISA法測定血清中的IFN-γ水平，放射免疫分析法檢測IL-10水平。
　　 結果：
　　 1.季節(jié)變化對健康大鼠肺組織形態(tài)學的影響春夏秋季組：大鼠肺組織支氣

10、管內及周圍結構連續(xù)，無明顯炎性細胞浸潤，組織黏膜未見充血水腫滲出及肺泡間隔狹窄，肺泡腔清亮寬敞無擴大。立冬組和冬至組：可見肺泡腔變窄，肺泡間隔變大，無明顯炎性細胞浸潤以及黏膜充血水腫。
　　 2.季節(jié)變化對正常大鼠血清Th1型細胞因子IFN-γ含量的影響在正常生理狀態(tài)下，全年健康SD大鼠血清中IFN-γ呈現(xiàn)出冬季較低，其他季節(jié)較高（立夏>春分>立春>立秋>秋分>夏至>冬至>立冬）的變化趨勢。與立冬組和冬至組比較，其他各組均顯著性

11、升高（P<0.05或P<0.01）；立夏組較夏至組、立秋組、秋分組、立冬組和冬至組均顯著性升高（P<0.05或P<0.01）；春分組較夏至組、秋分組、立冬組和冬至組均顯著性升高（P<0.05或P<0.01）。
　　 3.季節(jié)變化對正常大鼠血清Th2型細胞因子IL-10含量的影響在正常生理狀態(tài)下，全年健康SD大鼠血清中IL-10呈現(xiàn)出夏季較高，其他季節(jié)較低（立夏>夏至>立冬>立春>冬至>立秋>春分>秋分）的變化趨勢。與秋分組比較，

12、其他各組顯著性升高（P<0.05或P<0.01）。春夏冬季節(jié)間比較無顯著性差異（P>0.05）。
　　 結論：季節(jié)變化過程中大鼠血清中IFN-γ和IL-10的含量發(fā)生了季節(jié)性變化，季節(jié)通過調節(jié)它們的含量來影響機體Th1/Th2免疫平衡。冬季機體可能通過降低IFN-γ含量，升高IL-10含量，降低呼吸系統(tǒng)免疫功能，導致多種呼吸系統(tǒng)疾病疾病的發(fā)生。
　　 第三部分：季節(jié)變化對健康人外周血CD3+、CD4+、CD8+和CD56

13、+淋巴細胞比率的影響目的：通過在季節(jié)不同時點對健康人外周血CD3+、CD4+、CD86和CD56+淋巴細胞的檢測，探討季節(jié)變化對人體免疫功能的影響，為“天人相應”理論應用于臨床呼吸系統(tǒng)疾病的防治提供確切的客觀指標。
　　 方法：選取我校2007級新入學的學生志愿者20名，男女各10例，均經我校附屬醫(yī)院體檢合格，無各種感染、無急慢性口腔鼻咽疾病、腫瘤、免疫系統(tǒng)疾病或肝腎功能不全等病史，且在實驗期間內未使用抗生素、非甾體類消炎藥及影

14、響免疫系統(tǒng)功能的藥物。分別于8個節(jié)氣不同實驗日前7天充分休息且處于室內外自然環(huán)境狀態(tài)下，于實驗日下午在安靜空腹狀態(tài)下抽取2mL外周血。應用流式細胞術對外周血中CD3+、CD4+、CD8+、CD56+淋巴細胞進行分析。
　　 結果：
　　 1.季節(jié)變化對健康人外周血CD3+淋巴細胞數(shù)量的影響全年健康人外周血中CD3+T淋巴細胞比率呈現(xiàn)出夏季較高，冬季較低，春秋季節(jié)次之（夏至>立夏>立秋>立春>春分>秋分>立冬>冬至）的變化

15、趨勢。與立夏組和夏至組比較，立冬組和冬至組CD3+T淋巴細胞比率均顯著性下降（P<0.01）。
　　 2.季節(jié)變化對健康人外周血CD56+淋巴細胞數(shù)量的影響全年健康人外周血中CD56+自然殺傷淋巴細胞比率呈現(xiàn)出夏季較高，春秋冬季節(jié)較低（立夏>夏至>春分>立冬>立秋>立春>秋分>冬至）的變化趨勢。各季節(jié)組未見顯著性差異（P>0.05）。
　　 3.季節(jié)變化對健康人外周血CD4+T淋巴細胞比率的影響全年健康人外周血中CD4+

16、T淋巴細胞比率呈現(xiàn)出夏季較高，冬季較低，春秋季節(jié)次之（夏至>立夏>春分>立春>立秋>秋分>冬至>立冬）的變化趨勢。與立夏組和夏至組比較，立冬組和冬至組CD4+T細胞均顯著性下降（P<0.05）。
　　 4.季節(jié)變化對健康人外周血CD8+T淋巴細胞比率的影響全年健康人外周血中CD8+T淋巴細胞比率呈現(xiàn)出冬季較高，夏季較低，春秋季節(jié)次之（冬至>立秋>立春>立冬>秋分>春分>立夏>夏至）的變化趨勢。與夏至組比較，冬至組CB8+T細胞比

17、率均顯著性上升（P<0.05）。
　　 5.季節(jié)變化對健康人外周血CD4+/CD8+T細胞比值的影響全年健康人外周血中CD4+/CD8+T細胞比值呈現(xiàn)出夏季較高，冬季較低，春秋季節(jié)次之（夏至>立夏>春分>立春>立秋>秋分>立冬>冬至）的變化趨勢。與立夏組比較，冬至組CD4+/CD8+比值顯著性下降（P<0.05）；與夏至組比較，立秋組、秋分組、立冬組和冬至組CD4+/CD8+比值顯著性下降（P<0.05或P<0.01）。