重組靈芝免疫調(diào)節(jié)蛋白(rLZ-8)免疫調(diào)節(jié)及抗癌機(jī)制初步研究.pdf

1、Ling Zhi-8（LZ-8）是一種從靈芝（Ganoderma lucidium）菌絲體中提取出的真菌免疫調(diào)節(jié)蛋白。LZ-8具有免疫調(diào)節(jié)活性，可以促進(jìn)人外周血淋巴細(xì)胞和人外周血單個(gè)核細(xì)胞以及小鼠脾細(xì)胞的增殖，誘導(dǎo)分泌白細(xì)胞介素，腫瘤壞死因子和干擾素等細(xì)胞因子，以及調(diào)節(jié)免疫活性細(xì)胞黏附分子的表達(dá)，并且LZ-8具有抗腫瘤活性。目前其作用機(jī)制尚未完全清楚。
　　 本文通過畢赤酵母（Pichia pastoris）表達(dá)系統(tǒng)來表達(dá)重組靈

2、芝免疫調(diào)節(jié)蛋白（rLz-8），經(jīng)過純化的rLZ-8用綿羊紅細(xì)胞凝血實(shí)驗(yàn)以及小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)來檢測其生理活性，得到了高純度并且具有穩(wěn)定生理活性的rLZ-8樣品。用異硫氰酸熒光素（FITC）對(duì)rLZ-8進(jìn)行熒光標(biāo)記，將標(biāo)記后的FITC-rLZ-8分別與人外周血淋巴細(xì)胞（HPBL），小鼠脾細(xì)胞，293T細(xì)胞，A549細(xì)胞進(jìn)行共培養(yǎng)，利用激光共聚焦顯微鏡觀察rLZ-8在這些細(xì)胞中的亞細(xì)胞定位，結(jié)果發(fā)現(xiàn)rLZ-8在有些HPBL的細(xì)胞膜上富集

3、，而在有些HPBL細(xì)胞的內(nèi)部富集，僅在小鼠脾細(xì)胞的細(xì)胞膜上分布，僅在293T與A549細(xì)胞內(nèi)部分布，說明rLZ-8與不同細(xì)胞的作用方式和作用位點(diǎn)有所不同。
　　 利用MTT法測定rLZ-8對(duì)A549細(xì)胞增殖的影響，結(jié)果顯示rLZ-8能夠抑制A549細(xì)胞的增殖并且與rLZ-8的劑量和作用時(shí)間呈正相關(guān)。進(jìn)一步對(duì)與rLZ-8共培養(yǎng)的A549細(xì)胞進(jìn)行衰老相關(guān)的[β]-半乳糖苷酶（SA-[β]-Gal）染色實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明與rLZ-8共培養(yǎng)

4、的A549細(xì)胞表現(xiàn)出早熟衰老的特征，說明rLZ-8可能通過誘導(dǎo)A549細(xì)胞的早熟衰老來抑制其增殖。
　　 本文表達(dá)和純化了rLZ-8，得到了高純度并且具有穩(wěn)定生物活性的rLZ-8樣品，為大規(guī)模獲得rLZ-8從而進(jìn)一步研究LZ-8的功能和作用機(jī)制以及在臨床上的應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。并且利用FITC熒光標(biāo)記技術(shù)對(duì)rLZ-8在幾種細(xì)胞中的亞細(xì)胞定位做了初步的探索，同時(shí)發(fā)現(xiàn)rLZ-8對(duì)人類肺癌細(xì)胞A549的增殖有抑制作用，其原因可能是由于rL