人bFGF重組慢病毒載體轉(zhuǎn)染BMSCs的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：為提高骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)表達(dá)人堿性成纖維細(xì)胞生長因子(bFGF)的能力，同時(shí)使BMSCs被綠色熒光蛋白(GFP)穩(wěn)定標(biāo)記，探討攜帶GFP和人bFGF基因的慢病毒載體(1enti-bFGF-GFP)轉(zhuǎn)染骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)表達(dá)及不同的感染復(fù)數(shù)MOI(multiplicity of infection)轉(zhuǎn)染骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的效率。
　　 方法：全骨髓法分離培養(yǎng)純化大鼠BMSCs。實(shí)驗(yàn)分成三組：攜帶GFP和

2、人bFGF基因慢病毒感染的BMSCs(bFGF-GFP-BMSCs，實(shí)驗(yàn)組)，攜帶GFP基因慢病毒感染的BMSCs(GFP-BMSCs，空載體組)，未經(jīng)感染的BMSCs(空白組)；以定量酶聯(lián)免疫吸附分析(ELISA)和半定量RT-PCR檢測(cè)各組細(xì)胞培養(yǎng)72小時(shí)后bFGF的表達(dá)。MOI分別為10，30，50轉(zhuǎn)染BMSCs，熒光顯微鏡觀察GFP陽性率。
　　 結(jié)果：(1)ELISA法結(jié)果顯示：轉(zhuǎn)染72小時(shí)，bFGF-GFP-BMSC

3、s組表達(dá)bFGF蛋白量明顯高于GFP-BMSCs組和BMSCs組，差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。(2)RT-PCR結(jié)果顯示：轉(zhuǎn)染72小時(shí)，與GFP-BMSCs組和BMSCs組相比，bFGF-GFP-BMSCs組表達(dá)bFGF mRNA明顯增高。(3)MOI分別為10，30，50，其轉(zhuǎn)染BMSCs的效率分別為：36.6％，84.2％，98.5％。
　　 結(jié)論：攜帶GFP和人bFGF基因慢病毒成功轉(zhuǎn)染大鼠骨髓間質(zhì)干細(xì)胞，并在