NELL1慢病毒載體轉(zhuǎn)染人牙周膜干細(xì)胞對其成骨分化影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、背景：NELL1，一種與人顱縫早閉癥（craniosynostosis,CS）顱縫過早融合相關(guān)的新型分泌型蛋白，能促進(jìn)間充質(zhì)干細(xì)胞的成骨分化。
　　目的：研究NELL1對人牙周膜干細(xì)胞（humanperiodontalligamentstemcells,hPDLSC）體外成骨分化的作用并初步探討其作用機(jī)制。
　　方法：構(gòu)建攜帶NELL1的慢病毒載體（lenti-NELL1），用以轉(zhuǎn)染hPDLSCs，經(jīng)礦化誘導(dǎo)液誘導(dǎo)培養(yǎng)后，通

2、過檢測成骨標(biāo)志物堿性磷酸酶(alkalinephosphate,ALP)、骨鈣素（osteocalcin,OCN）及鈣沉積來評估NELL1對hPDLSCs的骨誘導(dǎo)作用。同時(shí)real-timePCR檢測成骨重要的轉(zhuǎn)錄因子（Msx2、Runx2）mRNA的表達(dá)變化。實(shí)驗(yàn)以只攜帶報(bào)告基因EGFP的空載體lenti-EGFP轉(zhuǎn)染的hPDLSCs為對照。
　　結(jié)果：WesternBlot及real-timePCR證實(shí)構(gòu)建的lenti-NEL

3、L1轉(zhuǎn)染hADSCs能成功表達(dá)有生物學(xué)活性的NELL1蛋白。與對照相比，lenti-NELL1組ALP、OCN、鈣沉積及Msx2mRNA都顯著提高（p＜0.01），而兩組間Runx2mRNA無顯著差異(p＞0.01)。結(jié)論：構(gòu)建編碼NELL1基因的慢病毒lenti-NELL1能夠成功感染hPDLSCs并使之長期穩(wěn)定表達(dá)有生物學(xué)效應(yīng)的NELL1。NELL1能顯著促進(jìn)hPDLSCs的成骨分化，在誘導(dǎo)成骨分化時(shí)，除了作為Runx2的下游介質(zhì)外