重組γ-干擾素腺病毒轉(zhuǎn)染的BMSCs體內(nèi)抗白血病作用研究.pdf

1、中山大學(xué)碩士學(xué)位論文重組γ干擾素腺病毒轉(zhuǎn)染的BMSCs體內(nèi)抗白血病作用研究姓名：徐海鵬申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師：呂躍20060501項(xiàng)士論文：重組干擾索腺病毒轉(zhuǎn)染的BMSCs體內(nèi)抗白mL病作用礎(chǔ)f究中文摘要體時(shí)，會(huì)導(dǎo)致載體特異性免疫反應(yīng)，不僅會(huì)降低基因轉(zhuǎn)移的效率，還會(huì)導(dǎo)致副作用的發(fā)生，如肝臟毒性等。本研究探討以重組腺病毒載體(E1區(qū)缺失和部分E3區(qū)缺失)介導(dǎo)IFNv基因轉(zhuǎn)染鼠BMSCs，研究IFN一7體外表達(dá)規(guī)律及IFN—

2、Y基因修飾的BMSCs體內(nèi)抗白血病細(xì)胞株K562移植瘤效應(yīng)。為慢性粒細(xì)胞自血病的基因治療提供一種思路和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。2實(shí)驗(yàn)方法21鼠BMSCs的分離、培養(yǎng)在操凈臺中取小鼠脛骨，取出骨髓，以DMEM—LG完全培養(yǎng)基(含10％胎牛血清，2mML谷氨酰胺，100units／ml青霉素，100gg／ml鏈霉素)重懸細(xì)胞，置于37。C、5％C02細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每天倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況，培養(yǎng)3～4天后，全量換液去除懸浮細(xì)胞，貼壁細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)

3、，每3天半量換液1次。約2周左右培養(yǎng)至達(dá)80％融合時(shí)，以O(shè)25％胰酶f含01％EDTA)在37℃消化，進(jìn)行傳代擴(kuò)增培養(yǎng)。22Ad／IFN轉(zhuǎn)染BMSCs后體外表達(dá)規(guī)律檢測腺病毒以MOI一50感染骨髓基質(zhì)細(xì)胞。RT—PCR檢測IFN—YmRNA的表達(dá)。ELISA定量測定轉(zhuǎn)染Ad／IFNY的BMSCs培養(yǎng)上清中的1FNY蛋白濃度。23Ad／IFN轉(zhuǎn)染BMSCs靜脈及皮下應(yīng)用體內(nèi)表達(dá)規(guī)律檢測以MOI=50感染骨髓基質(zhì)細(xì)胞，備用于體內(nèi)實(shí)驗(yàn)。將轉(zhuǎn)染