豬圓環(huán)病毒2型PCR檢測方法的建立及其甘肅分離株的遺傳變異分析.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、本文對豬圓環(huán)病毒2型PCR檢測方法的建立及其甘肅分離株的遺傳變異進(jìn)行了研究。文章建立了快速檢測PCV2的PCR方法，并對PCV2甘肅分離株的遺傳變異情況進(jìn)行了分析，獲得結(jié)果如下。 1.根據(jù)GenBarlk中PCV2全基因組序列設(shè)計(jì)了擴(kuò)增片段大小為262 bp的引物P1/P2。為獲得該對引物最佳的擴(kuò)增效果和最高的敏感性，實(shí)驗(yàn)對該對引物的擴(kuò)增條件進(jìn)行了摸索和調(diào)整，即運(yùn)用正交法，梯度性地改變變性溫度和時(shí)間、退火溫度和時(shí)間、延伸時(shí)間以及

2、循環(huán)數(shù)等條件。最后確定了引物對P1/P2的最佳擴(kuò)增效果，建立了檢測PCV2的PCR方法。該引物從PCV2陽性病毒感染基因組中擴(kuò)增出特異性條帶的最低DNA含量為10<'-6>ng/mL(約100個(gè)PCV2病毒)。用該方法對我國甘肅省的75份臨床發(fā)病豬的肺臟和淋巴結(jié)樣品進(jìn)行檢測，結(jié)果有39份樣品為陽性，陽性率為52％。 2.根據(jù)Gengbank中發(fā)表的PCV2的全基因序列，設(shè)計(jì)一對特異性引物P3/P4。從該省PCV2陽性病料中抽取不

3、同地區(qū)的樣品6份，從6份陽性病料中直接擴(kuò)增出PCV2全基因序列，分別命名為Gansu1、Gansu2、 Gansu3、Gansu4、GarlSil5、Gansu6。將擴(kuò)增片段克隆入pMD 18-T載體。對質(zhì)粒中的插入片段進(jìn)行序列測定表明，Ganshu5的基因組長度為1768bp，其余各株均為1767bp。應(yīng)用DNAstar序列分析軟件，對測定的6個(gè)PCv2毒株全基因組序列與Gengbank中PCV毒株進(jìn)行同源性比較并繪制系統(tǒng)發(fā)生樹，結(jié)果

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