豬2型圓環(huán)病毒感染的PCR檢測(cè)及甘肅株的同源性分析.pdf

1、豬2型圓環(huán)病毒(Porcine circovirus type 2，PCV2)病是當(dāng)今養(yǎng)豬業(yè)嚴(yán)重關(guān)切的傳染病之一，該病的廣泛流行和蔓延已給世界各國(guó)養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展造成了嚴(yán)重威脅和經(jīng)濟(jì)損失。在現(xiàn)代化規(guī)模養(yǎng)豬場(chǎng)中，PCV2往往與其他疫病混合感染，發(fā)病率呈上升趨勢(shì)。因此，為了有效控制這該病流行，減少由此引起的經(jīng)濟(jì)損失，本研究以PCV2當(dāng)?shù)亓餍卸局瓴×蠟檠芯坎牧?，進(jìn)行了基因克隆、分子結(jié)構(gòu)特征分析、分子診斷以及流行病學(xué)調(diào)查，主要研究成果如下：

2、 1、參照GenBank己發(fā)表的PCV2基因序列，設(shè)計(jì)合成1對(duì)引物，對(duì)PCV2的ORF2基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增，獲得目的片段，經(jīng)條件篩選，建立了PCR檢測(cè)方法。采用該方法對(duì)甘肅9個(gè)不同地區(qū)規(guī)?；i場(chǎng)的114份病料進(jìn)行PCV2檢測(cè)，陽(yáng)性率達(dá)73.3％，證實(shí)甘肅規(guī)?；i場(chǎng)普遍存在PCV2感染。 2、對(duì)PCV2感染豬的癥狀及病理變化進(jìn)行觀察，結(jié)果表明，患豬主要表現(xiàn)為生長(zhǎng)不良、腹瀉及懷孕母豬流產(chǎn)等癥狀，患豬精神不振、消瘦，個(gè)別發(fā)生黃疽。剖檢

3、可見(jiàn)全身淋巴結(jié)顯著腫大，肺臟出血、水腫以及發(fā)生肉樣變等，病理組織學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)組織器官內(nèi)淋巴細(xì)胞減少，生發(fā)中心內(nèi)淋巴細(xì)胞消失，在巨嗜細(xì)胞內(nèi)發(fā)現(xiàn)嗜堿性包涵體。 3、通過(guò)ORF2基因序列比較發(fā)現(xiàn)GS0601strain和GSO602strain兩個(gè)毒株ORF2序列差異較大，同源性僅為91.5％；其中GS060lstrain與中國(guó)大多數(shù)分離株的同源性較高，達(dá)98％以上，而與歐洲及北美洲地區(qū)毒株差異較大，同源性僅為91％-93％；GS060

4、2strain則相反，與中國(guó)大多數(shù)分離株同源性為90％-92％，與歐洲和北美洲株同源性相對(duì)來(lái)說(shuō)較高，達(dá)94％-95％；此外還可發(fā)現(xiàn)大多數(shù)中國(guó)分離株與荷蘭分離株的ORF2序列相似性較高。 4、通過(guò)研究PCV2毒株遺傳學(xué)特性及相互的親緣關(guān)系，發(fā)現(xiàn)PCV2可分成兩大組群，其中GS0601株與中國(guó)的13株分離株、荷蘭的4株以及法國(guó)株同屬一個(gè)組群，而GS0602則與兩株中國(guó)分離株以及其它國(guó)家分離株屬于另一個(gè)組群，也就是說(shuō)甘肅張掖地區(qū)和白銀