不同豬群豬圓環(huán)病毒2型的檢測及其全基因序列分析.pdf

1、豬圓環(huán)病毒2型(Porcine circovirus type 2，PCV2)為無囊膜的單股負(fù)鏈DNA病毒，屬圓環(huán)病毒科(Circoviridae)成員。PCV2與豬群中發(fā)生的多種傳染性疾病密切相關(guān)，如仔豬斷奶后多系統(tǒng)衰竭綜合征(Postwealling multisystemic wasting syndrome，PMWS)、豬皮炎與腎炎綜合征(Porcine dermatitis and nephropathy syndrome，P

2、DNS)、豬呼吸道綜合征(Porcine respiratory disease complex，PRDC)等。PMWS是一種以進(jìn)行性消瘦和多系統(tǒng)病理損傷為主要特征的免疫抑制性疾病，主要發(fā)生在6-16周齡的斷奶仔豬。該病在我國自2000年首次報道以來，已廣泛流行于全國各省，威脅著我國的養(yǎng)豬業(yè)，并造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。目前，對健康豬群中感染的PCV2病原學(xué)檢測和基因遺傳變異研究尚少有報道。本研究主要包括以下幾方面內(nèi)容： 1、PCV

3、2套式PCR檢測方法的建立：根據(jù)GenBank中已發(fā)表的PCV2全基因序列，設(shè)計兩對PCV2特異性引物，建立用于PCV2檢測的套式PCR檢測方法。外側(cè)引物p1／p2擴(kuò)增的基因片段長度為647bp(92nt-738nt)，內(nèi)側(cè)引物p3／p4擴(kuò)增片段長219bp(319nt-537nt)。經(jīng)優(yōu)化PCR擴(kuò)增條件后，第一輪PCR可擴(kuò)增最低DNA模板濃度為10<'-5>pg／mL；第二輪PCR可擴(kuò)增最低DNA模板為10<'-8>pg／mL，比第一

4、輪擴(kuò)增敏感性增加1000倍。通過與常規(guī)PCR對85份來自山東德州地區(qū)臨床發(fā)病豬樣品進(jìn)行檢測效率的比對試驗，證明本方法的陽性檢出率較高；同時也證明該地區(qū)發(fā)病豬群普遍存在PCV2感染。 2、患病豬群和健康豬群PCV2感染的檢測：應(yīng)用套式PCR方法，對我國10個省份826份臨床發(fā)病豬肺臟、淋巴結(jié)樣品和5個屠宰場146份健康豬淋巴結(jié)樣品進(jìn)行PCV2檢測，結(jié)果為：患病豬群和健康豬群PCV2陽性樣品分別為316份和64份，陽性率為38.3％

5、和43.8％。表明我國發(fā)病豬群和健康豬群中普遍存在PCV2感染。 3、患病豬群PCV2檢測陽性樣品中其它病原體檢測：對除甘肅省外的其它9個省份的283份PCV2陽性樣品進(jìn)行PRRSV、PPV和CSFV的PCR檢測，結(jié)果為：CSFV、PRRSV和PPV陽性樣品分別為74份、94份和46份，陽性率分別為26.1％、33.2％和16.3％。表明這些地區(qū)發(fā)病豬群中的雙重感染情況普遍存在。 4、兩類豬群感染的PCV2全基因序列分析