豬圓環(huán)病毒PCR-RFLP分型方法的建立及其國(guó)內(nèi)流行毒株的遺傳變異分析.pdf

1、豬圓環(huán)病毒2型(PorcineCircovirusType2，PCV2)是近些年來(lái)對(duì)養(yǎng)豬業(yè)危害最嚴(yán)重的病毒之一，主要包括斷奶豬多系統(tǒng)衰竭綜合征(PostweaningMultisystemicWastingSyndrome，PMWS)、斷奶豬和育肥豬的呼吸道疾病(PorcineRespiratoryDiseasecomplex,PRDS)、豬皮炎和腎炎綜合征(PorcineDernmatisandNephropathySyndrome，

2、PDNS)、幼齡仔豬A2型先天性震顫(CongenitalTremors，CT)、間質(zhì)性肺炎(InterstitialPneumonitis，IP)、增生性壞死性肺炎(ProliferationNecrotizingPneumonia,PNP)等。PCV2的感染能降低豬體免疫力，常引起其他病原微生物的繼發(fā)并發(fā)感染，加重病情。自1982年命名以來(lái)，發(fā)展迅速，在世界許多國(guó)家和地區(qū)廣泛流行，給世界養(yǎng)豬業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失，嚴(yán)重影響著世界養(yǎng)豬業(yè)

3、的發(fā)展。我國(guó)很多地區(qū)也陸續(xù)報(bào)道有PCV2流行，黑龍江省有PCV2感染的疑似病例，黑龍江省獸醫(yī)衛(wèi)生防疫站的張加勇等已經(jīng)對(duì)黑龍江省內(nèi)的6個(gè)地(市)十個(gè)種豬場(chǎng)進(jìn)行了PCV2血清學(xué)調(diào)查，但尚無(wú)病原學(xué)診斷的證據(jù)，為了為PCV2的實(shí)驗(yàn)室診斷提供一種可靠的病原學(xué)檢測(cè)方法，本研究旨在建立一種快速、方便的PCV的PCR-RFLP分型方法適用于現(xiàn)地檢測(cè)。通過(guò)對(duì)GenBank中公布的8株P(guān)CV2和8株P(guān)CV1基因組全序列的比較分析，設(shè)計(jì)一對(duì)PCV2特異引物，

4、含有特異性酶切位點(diǎn)EcoRI和一對(duì)PCV1特異引物，含有特異性酶切位點(diǎn)HincⅡ；兩對(duì)引物均含ORF2。建立了一種快速檢測(cè)PCV1和PCV2的敏感、特異、重復(fù)性好的PCR-RFLP鑒別診斷方法，應(yīng)用本方法對(duì)對(duì)國(guó)內(nèi)部分地區(qū)的PCV2分離株的ORF2遺傳變異情況進(jìn)行了分析，9株P(guān)CV2的ORF2基因核酸序列同源性比較，同源性大于97％，在進(jìn)化樹上與國(guó)內(nèi)的分離株處于同一分支上，關(guān)系最近；PCV2的ORF2呈現(xiàn)一定的地域性和相對(duì)的穩(wěn)定性。在發(fā)病