三聚氰胺對(duì)孕鼠胎盤和仔鼠毒性作用的探討.pdf

1、目的：三聚氰胺被認(rèn)為是一種低毒的化工原料，動(dòng)物長(zhǎng)期攝入三聚氰胺會(huì)造成生殖、泌尿系統(tǒng)的損害，膀胱、腎部結(jié)石，并可進(jìn)一步誘發(fā)膀胱癌。以往的研究主要集中在三聚氰胺對(duì)動(dòng)物泌尿系統(tǒng)的損害方面，對(duì)生殖毒性研究方面目前國(guó)內(nèi)外尚無(wú)系統(tǒng)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)建立孕鼠持續(xù)暴露于不同劑量的三聚氰胺染毒模型，研究：1.三聚氰胺暴露對(duì)孕鼠胎盤組織結(jié)構(gòu)及仔鼠的影響。2.三聚氰胺暴露對(duì)孕鼠胎盤細(xì)胞凋亡調(diào)控基因Bax、Bcl-2蛋白表達(dá)的影響。初步探討三聚氰胺暴露對(duì)孕鼠及仔

2、鼠的毒性作用及其發(fā)生機(jī)制。
　　 方法：3月齡雌性Wistar大鼠48只，經(jīng)適應(yīng)性飼養(yǎng)并受孕后隨機(jī)分為4組，每組12只。從妊娠第6天起每日上午8-9時(shí)灌胃染毒，按體重給藥低、中、高劑量組分別為400mg/(kg·d)、800mg/(kg·d)、1200mg/(kg·d)，灌胃容量為1mL/0.3kg體重，連續(xù)染毒14天。正常對(duì)照組給予不含三聚氰胺的植物油。在妊娠第0、6、11、16、20天稱體重，并按體重調(diào)整給藥量。妊娠第20天

3、戊巴比妥鈉麻醉后剖腹取胎。1.取出子宮稱取窩重，切開子宮檢查有無(wú)吸收胎、死胎并計(jì)數(shù)著床數(shù)、活胎數(shù)、吸收胎數(shù)及死胎數(shù)。取出胎鼠，稱取活胎重及胎盤重，量取活胎鼠身長(zhǎng)、尾長(zhǎng)。2.每只孕鼠隨機(jī)選取2只胎鼠，取出完整胎腎置于10％甲醛中充分固定，石蠟包埋，光鏡觀察胎鼠腎臟組織結(jié)構(gòu)的改變。3.剝離孕鼠胎盤，經(jīng)甲醛固定、石蠟包埋切片，一部分經(jīng)HE染色，觀察其組織形態(tài)變化；其余切片采用免疫組織化學(xué)染色法檢查胎盤組織細(xì)胞凋亡調(diào)控基因Bax、Bcl-2的蛋

4、白表達(dá)情況。4.全部資料均采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。組間比較采用多組單因素方差分析，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以x±s表示。各種率的統(tǒng)計(jì)應(yīng)用卡方檢驗(yàn)。
　　 結(jié)果：
　　 1.對(duì)照組、低劑量組和中劑量組三組間仔鼠體重、身長(zhǎng)及尾長(zhǎng)比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；高劑量組仔鼠體重、身長(zhǎng)及尾長(zhǎng)明顯低于其他三組，與其他三組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 2.各組間胎盤重量比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 3.高劑量組

5、窩重明顯低于其他三組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。與其他三組相比較，高劑量組的不良妊娠結(jié)局(死胎、吸收胎)增多、活胎數(shù)減少。受精卵著床數(shù)各組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 4.對(duì)照組和低劑量組仔鼠腎臟組織結(jié)構(gòu)未見明顯改變，中劑量組和高劑量組仔鼠腎臟中均出現(xiàn)結(jié)晶狀物質(zhì)，中劑量組仔鼠腎臟未觀察到明顯的組織病理改變，但高劑量組仔鼠腎臟出現(xiàn)炎性改變。
　　 5.胎盤組織形態(tài)學(xué)的改變5.1大體觀察結(jié)果：對(duì)照組胎盤中央厚、邊緣

6、薄，呈暗紅色，胎兒面由透明羊膜覆蓋，表面光滑；低劑量組和中劑量組胎盤無(wú)明顯改變；高劑量組的胎盤外觀呈紫紅色、無(wú)光澤，部分胎盤腫脹淤血，胎兒面羊膜混濁，光澤暗淡。
　　 5.2光鏡觀察結(jié)果：對(duì)照組基帶、海綿帶、迷路帶結(jié)構(gòu)清晰，滋養(yǎng)層細(xì)胞無(wú)明顯增生，絨毛無(wú)腫脹；低劑量組胎盤結(jié)構(gòu)未見明顯改變；中劑量組海綿帶滋養(yǎng)層細(xì)胞呈輕微退行性變，空泡化細(xì)胞增多，絨毛周圍纖維蛋白沉淀不明顯；高劑量組基帶腫脹增厚，部分胎盤基帶見灶狀壞死以及少許淋巴細(xì)胞

7、、單核細(xì)胞浸潤(rùn)，海綿帶滋養(yǎng)層巨細(xì)胞增大，數(shù)目增多，空泡化細(xì)胞島增多，迷路帶血竇擴(kuò)張淤血嚴(yán)重，海綿帶及迷路帶部分滋養(yǎng)層細(xì)胞呈退行性改變，絨毛腫脹增粗，絨毛間隙變窄，絨毛周圍纖維蛋白沉積增多。
　　 6.胎盤組織Bax和Bcl-2的表達(dá)情況6.1Bax基因和Bcl-2基因均主要表達(dá)于胎盤合體滋養(yǎng)層細(xì)胞，Bax在絨毛間質(zhì)細(xì)胞及血管內(nèi)皮細(xì)胞等處也可見表達(dá)，但Bcl-2在絨毛間質(zhì)細(xì)胞及血管內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)很少。Bax主要定位于胞漿和胞膜；Bc

8、l-2主要定位于胞漿中，少數(shù)胞核也呈陽(yáng)性。
　　 6.2胎盤組織中Bax的蛋白表達(dá)量四組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=17.42，P＜0.01)，染毒組胎盤組織中Bax的蛋白表達(dá)量比正常對(duì)照組明顯增多，并且隨著染毒劑量的增加Bax的表達(dá)量逐漸增多；胎盤組織中Bcl-2的蛋白表達(dá)量四組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=23.62，P＜0.01)，染毒組胎盤組織中Bcl-2的蛋白表達(dá)量比正常對(duì)照組明顯降低，并且隨著染毒劑量的增加Bcl-2的

9、表達(dá)量逐漸減少；Bax/Bcl-2比值四組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=66.65，P＜0.01)。
　　 結(jié)論：
　　 1.高劑量三聚氰胺暴露可引起仔鼠出現(xiàn)明顯的中毒現(xiàn)象，表現(xiàn)為仔鼠的體重、身長(zhǎng)、尾長(zhǎng)及窩重明顯降低，活胎數(shù)減少，死胎、吸收胎數(shù)增加，表明孕期暴露于高劑量的三聚氰胺可能會(huì)引起胚胎發(fā)育障礙和營(yíng)養(yǎng)不良。
　　 2.妊娠期間長(zhǎng)期暴露于高劑量的三聚氰胺，可能會(huì)通過(guò)胎盤作用于仔鼠腎臟組織，造成先天性的腎臟疾病。

10、
　　 3.高劑量三聚氰胺暴露可引起胎盤組織炎性病變，對(duì)胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞造成損傷，從而妨礙胎盤的血液供應(yīng)及母胎間營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和氧氣的交換，引起仔鼠宮內(nèi)生長(zhǎng)受限及其他生殖毒性。
　　 4.三聚氰胺可引起胎盤組織中Bax過(guò)度表達(dá)，Bcl-2表達(dá)減少，改變Bax/Bcl-2比值，使胎盤組織細(xì)胞的增殖和凋亡平衡紊亂，進(jìn)而可能影響胎盤組織的物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)及內(nèi)分泌功能，對(duì)胚胎生長(zhǎng)發(fā)育產(chǎn)生不良影響，這也可能是孕期三聚氰胺暴露致孕鼠生殖毒性和胚胎發(fā)育