三聚氰胺與三聚氰胺混合暴露毒理學效應的研究.pdf

1、近來，北美發(fā)生的寵物食品三聚氰胺污染事件和中國奶粉含三聚氰胺事件又一次觸動人們對食品安全的關注。三聚氰胺是用于工業(yè)制造塑料等用品的原料，卻由于其含氮量高達66.7％，而被添加到乳制品中，造成產(chǎn)品中蛋白含量增高的假象。研究表明，三聚氰胺本身是低毒性的，之所以會導致腎毒性的發(fā)生，是由于上述食品中含有三聚氰胺的同系物三聚氰酸，兩者共存時形成復合物，堵塞腎小管，導致急性腎毒性的發(fā)生。目前，有關三聚氰胺及三聚氰酸各自的毒性已有研究，但三聚氰胺與三

2、聚氰酸混合暴露的毒理學效應尚不明確。
　　 混合暴露指兩種或兩種以上的毒物同時或短時間內(nèi)先后作用于機體，這樣產(chǎn)生的毒性不一定是兩種毒物自身毒性的簡單加和作用。因此，我們從細胞毒性和遺傳毒性兩個方面研究三聚氰胺與三聚氰酸混合暴露所產(chǎn)生的毒理學效應。有毒物質(zhì)進入機體，導致細胞結構和功能的改變，即為細胞毒性.細胞是生物體新陳代謝的基本單位，所以對于細胞毒性的研究很重要。另一方面，環(huán)境中的有毒物質(zhì)進入機體，導致遺傳信息的載體-DNA結構

3、的改變或遺傳物質(zhì)的損失，即產(chǎn)生所謂的遺傳毒性。遺傳毒性直接影響的是DNA，導致親代的信息在遺傳給子代時出現(xiàn)缺陷，不能保持遺傳性狀的穩(wěn)定性，因此，有關遺傳毒性的研究也非常重要。
　　 針對以上問題，我們利用MTT實驗檢測細胞毒性，用不同濃度的三聚氰胺，三聚氰酸分別處理人胚腎細胞(293細胞)，低劑量單獨作用(0.5 mg/mL)時，兩者都沒有明顯的細胞毒性，但隨濃度增高細胞毒性逐漸增強，達到5mg/mL時，尤其到24h處理結束后，

4、5mg/mL的三聚氰酸細胞存活率接近陽性對照組(H2O2)。因此，我們選用0.5mg/mL作為混合暴露的終劑量，分析相同濃度的三聚氰胺與三聚氰酸在不同體積比100∶1，10∶1，1:10，1∶100(v∶v)混合暴露作用于293細胞所產(chǎn)生的細胞毒性和遺傳毒性。MTT實驗結果表明，三聚氰胺與三聚氰酸體積比為100∶1和10:1時，細胞活性在2h時有所下降，但之后逐漸恢復到對照組水平。三聚氰胺與三聚氰酸體積比為1∶10時呈現(xiàn)類似趨勢，但細胞

5、活性下降趨勢更明顯；1∶100時，細胞存活率急劇下降，接近陽性對照的水平。繼而我們又研究了三聚氰胺與三聚氰酸混合暴露的遺傳毒性，通過γH2AX焦點免疫熒光方法檢測發(fā)現(xiàn)，三聚氰胺或三聚氰酸單獨作用時，不會造成DNA損傷，但是，當三聚氰胺與三聚氰酸體積比為100∶1的混合物處理293細胞24h后，含有γH2AX焦點數(shù)大于20個的細胞比例顯著的高于空白對照組，說明這一情況下的混合暴露對細胞造成了DNA損傷；但其它比例混合暴露處理后與對照組相比

6、沒有顯著的差異。而另一檢測遺傳毒性的經(jīng)典方法-堿性彗星實驗方法檢測后發(fā)現(xiàn)，三聚氰胺或三聚氰酸單獨作用時，沒有彗星拖尾現(xiàn)象，說明不存在DNA損傷，但是當三聚氰胺與三聚氰酸按體積比分別為100∶1，10∶1，1∶10，和1∶100混合暴露處理后細胞都產(chǎn)生了與空白對照組相比顯著的拖尾現(xiàn)象，說明當三聚氰胺與三聚氰酸混合暴露后會造成DNA損傷。雖然免疫熒光方法和堿性彗星實驗的結果不完全一致，這可能是由于兩種方法的實驗原理和判定DNA損傷的指標不同