恐傷孕鼠對其仔鼠腦發(fā)育的影響及其機制研究.pdf

1、目的本實驗采用“恐傷孕鼠”的方法復制腎精虧虛的模型，研究孕鼠腎虛對其仔鼠腦發(fā)育的影響機制。 方法①本實驗采用3月齡SD(Sprague-Dawley)大鼠雌性30只，雄性15只，將其按2∶1的比例合籠配對。受孕后的雌鼠用隨機取數(shù)法分為正常組、模型組和補腎組，每組各10只。自懷孕第一天起，模型組和補腎組每日上、下午用貓恐嚇孕鼠各2小時直至其分娩，在仔鼠出生當天和生后14天進行指標檢測。②記錄孕鼠產子數(shù)，評估其生育力。記錄仔鼠開眼、

2、出牙、張耳、被毛生長的時間；用電子天平稱取仔鼠出生當天的體重及全腦濕重和生后14天的體重，從而判斷仔鼠的生長發(fā)育狀況。③光學顯微鏡和電子顯微鏡觀察各組仔鼠出生當天和生后14天時大腦海馬區(qū)的形態(tài)學改變。④化學發(fā)光法檢測各組仔鼠生后14天時血清游離三碘甲腺原氨酸(FT3)、游離四碘甲腺原氨酸(FT4)及促甲狀腺激素(TSH)的含量。⑤用瓊脂糖凝膠電泳法檢測各組仔鼠生后14天時海馬區(qū)腦組織DNA降解片斷，同時用免疫組化法觀察細胞凋亡的相關指標

3、Bcl-2/bax在海馬區(qū)腦組織的表達。⑥用酶標儀檢測各組仔鼠生后14天時海馬區(qū)腦組織內乙酰膽堿轉移酶(CHAT)和乙酰膽堿酯酶(Ache)的活力。⑦用逆轉錄-聚合酶鏈式反應(RT-PCR)法檢測腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)在各組仔鼠生后14天時海馬區(qū)腦組織的表達。 結果①孕鼠產子數(shù)、仔鼠的生長發(fā)育狀況：模型組孕鼠的每胎生產數(shù)低于正常組和補腎組(P＜0.01)。模型組仔鼠的生長發(fā)育落后于正常組和補腎組。補腎組與正常組相比無差異

4、。②仔鼠大腦組織包括海馬區(qū)的形態(tài)學改變：模型組仔鼠大腦組織包括海馬區(qū)光鏡下見神經(jīng)細胞數(shù)量減少，細胞間質水腫，神經(jīng)元樹突分支減少。電鏡下大多數(shù)神經(jīng)細胞的細胞器結構有異常，部分細胞核固縮。正常組與補腎組仔鼠形態(tài)學相比無明顯改變。③仔鼠生后14天時血清FT3、FT4、TSH的含量：模型組仔鼠血清FT4的含量低于正常組(P＜0.05)，血清FT3、TSH的含量與正常組相比無差異。補腎組仔鼠血清FT3、FT4、TSH的含量與正常組相比無統(tǒng)計學差異

5、。④仔鼠生后14天時海馬區(qū)腦組織的細胞凋亡及Bcl-2/bax在海馬區(qū)腦組織的表達：模型組仔鼠海馬區(qū)腦組織可見DNA降解片斷，正常組和補腎組則未見。模型組仔鼠較正常組和補腎組比較，其Bcl-2表達下調，bax表達上調。⑤仔鼠生后14天時海馬區(qū)腦組織內CHAT和Ache的活力：模型組仔鼠AchE、CHAT的活力較正常組和補腎組樣本高(P＜0.01)。正常組和補腎組相比無統(tǒng)計學差異。⑥仔鼠生后14天時BDNF在海馬區(qū)腦組織的表達：模型組仔鼠

6、BDNFmRNA的半定量表達較正常組和補腎組下降，正常組和補腎組相比無差異。 結論本課題首次提出了“腎主腦發(fā)育”的觀點，并從腎對腦的結構和功能影響的角度進行了深入的理論探討。本實驗采用“恐傷孕鼠”的方法成功復制出腎精虧虛模型，發(fā)現(xiàn)模型組仔鼠具有先天腎虛的表現(xiàn)，其腦發(fā)育存在明顯的障礙，中藥補腎填精方可有效阻斷腎虛對腦發(fā)育的影響。模型組仔鼠血清TH含量顯著下降，伴隨著BDNF和Bcl-2表達下調，bax表達上調，CHAT和Ache活