選擇性PPARγ調(diào)節(jié)劑治療Ⅱ型糖尿病的藥物篩選與藥效學(xué)評(píng)價(jià).pdf

1、目前，糖尿病已經(jīng)成為了繼心腦血管疾病和癌癥之后嚴(yán)重威脅人類健康的第三大疾病。其中糖尿病患者中約95％為Ⅱ型糖尿病患者。Ⅱ型糖尿病主要的發(fā)病基礎(chǔ)是胰島素抵抗。胰島素抵抗的概念是指機(jī)體對(duì)一定濃度的胰島素的生物學(xué)作用不能保持正常水平，表現(xiàn)為胰島素的靶器官或靶組織對(duì)胰島素敏感性及反應(yīng)性降低。過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體γ(PPARγ)屬于核受體家族成員，是配體激活轉(zhuǎn)錄因子，參與葡萄糖和脂代謝的調(diào)節(jié)，增加組織對(duì)胰島素的敏感性，改善胰島素抵抗。

2、>　　噻唑烷二酮類是一種針對(duì)PPARγ的糖尿病治療藥物，其不良反應(yīng)有增加體重，水腫和水潴留，誘發(fā)和加重心功能不全及肺水腫。因此，具有胰島素增敏效果而無(wú)其他副作用的選擇性PPARγ部分激動(dòng)劑是開(kāi)發(fā)新型Ⅱ型糖尿病藥物的方向。
　　本研究建立了基于螢火蟲(chóng)熒光素酶報(bào)告基因的新藥篩選模型。通過(guò)將PPARγ的配體結(jié)合區(qū)（PPARγ-LBD）基因序列克隆到含有GAL4 DNA結(jié)合域的pBIND載體構(gòu)建pBIND-PPARγ-LBD的重組質(zhì)粒。該

3、質(zhì)粒與含GAL4響應(yīng)元件和熒光素酶的報(bào)告質(zhì)粒pG5 luc質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染至HEK-293T細(xì)胞中，通過(guò)測(cè)定螢火蟲(chóng)熒光素酶的活性評(píng)價(jià)化合物的轉(zhuǎn)錄激活活性。之后對(duì)MDC小分子片段庫(kù)進(jìn)行化合物篩選。而且對(duì)PPARγ-LBD蛋白進(jìn)行表達(dá)純化，在質(zhì)譜水平上驗(yàn)證篩選出的化合物與PPARγ-LBD蛋白是否有結(jié)合活性。
　　利用糖皮質(zhì)激素-地塞米松刺激HepG2細(xì)胞使之產(chǎn)生胰島素抵抗，從而建立胰島素抵抗模型。在此細(xì)胞模型上進(jìn)行體外藥效學(xué)篩選。為了進(jìn)一

4、步明確化合物的降糖作用，利用高脂飲食聯(lián)合鏈脲佐菌素建立Wistar大鼠Ⅱ型糖尿病模型，對(duì)化合物進(jìn)行體內(nèi)水平藥效篩選。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，化合物MDCCCL1636能夠在細(xì)胞水平改善胰島素抵抗;改善糖尿病大鼠體重;明顯降低血清中的葡萄糖、甘油三酯、總膽固醇和低密度脂蛋白膽固醇的濃度，升高高密度脂蛋白的水平;降低給糖后的高血糖作用。結(jié)果表明化合物MDCCCL1636能夠改善糖脂代謝紊亂，對(duì)Ⅱ型糖尿病有較好的治療作用。
　　通過(guò)體外細(xì)胞毒性實(shí)

5、驗(yàn)、斑馬魚(yú)胚胎發(fā)育毒性實(shí)驗(yàn)和大鼠急性毒性實(shí)驗(yàn)，對(duì)化合物MDCCCL1636進(jìn)行體內(nèi)外毒性評(píng)價(jià)，結(jié)果表明MDCCCL1636的毒性小于匹格列酮。
　　最后，對(duì)化合物影響細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)傳導(dǎo)通路進(jìn)行研究，化合物MDCCCL1636能夠提高AKT、GSK-3β、GS的活性，表明化合物通過(guò)PI3K信號(hào)途徑調(diào)節(jié)糖脂代謝。
　　總之，本研究通過(guò)體內(nèi)體外多種篩選方法篩選，篩選出化合物MDCCCL1636具有PPARγ部分激動(dòng)活性，能夠改善胰島