結(jié)直腸癌和肺癌KRAS和BRAF基因突變HRM檢測(cè)方法的建立.pdf

1、南方醫(yī)科大學(xué)2009級(jí)碩士學(xué)位論文結(jié)直腸癌和肺癌KRAS和BRAF基因突變HRM檢測(cè)方法的建立EstablishmentofhighresolutionmeltinganalysisfordetectingKRASandBRAFgenemutationsincolorectalcancerandlungcancer課題來源：自選專業(yè)名稱學(xué)位申請(qǐng)人指導(dǎo)教師答辯委員會(huì)主席答辯委員會(huì)成員臨床檢驗(yàn)診斷學(xué)劉麗琴王捷教授姜儻教授裘宇容教授馬艷華教授

2、李薇教授李林海副教授論文評(píng)閱人陳曉東教授夏勇教授2012年4月10日中文摘要變?yōu)锳(T1799A)。BRAF在結(jié)直腸癌的高、中、低分化中表達(dá)的陽(yáng)性率差異明顯，腫瘤分化程度越低，BRAF陽(yáng)性表達(dá)率越高，可為結(jié)直腸癌的診斷、治療提供新的依據(jù)。目前，結(jié)直腸癌和肺癌的治療仍以手術(shù)治療為主，輔助以化學(xué)藥物治療、放射治療。但是，隨著腫瘤分子生物學(xué)、基因組學(xué)的不斷發(fā)展，腫瘤靶向治療預(yù)測(cè)指標(biāo)及分子靶向治療藥物受到了越來越多的重視，并被逐漸應(yīng)用到臨床治療

3、當(dāng)中。近些年來，結(jié)直腸癌和肺癌的治療領(lǐng)域中最大亮點(diǎn)是確定KRAS基因和BRAF基因狀態(tài)與抗EGFR抗體療效的相關(guān)性。最新的研究顯示，靶向治療藥物西妥昔單抗治療的有效性受KRAS基因和BRAF基因狀態(tài)的影響，突變型的KRAS基因和BRAF基因無需EGFR接收信號(hào)能夠自動(dòng)活化該通路并啟動(dòng)下游信號(hào)的轉(zhuǎn)導(dǎo)，因此只有野生型KRAS和BRAF基因的患者才能從抗EGFR的治療中獲益，而突變型的患者則不能。因此，美國(guó)國(guó)立綜合癌癥網(wǎng)絡(luò)(NCCN)推薦在使

4、用抗EGFR單克隆抗體進(jìn)行治療之前，先對(duì)患者進(jìn)行KRAS和BRAF基因突變檢測(cè)。對(duì)于存在KRAS和BRAF突變的患者，不推薦使用抗EGFR單克隆抗體進(jìn)行治療。目前，國(guó)內(nèi)外檢測(cè)基因突變的方法很多，如PCR產(chǎn)物直接測(cè)序法、Taqman探針法、單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析法、限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性分析方法、焦磷酸測(cè)序方法、變性高效液相色譜法、突變特異性擴(kuò)增系統(tǒng)等。這些方法存在著成本高、操作復(fù)雜或靈敏度低等問題，不利于臨床大樣本檢測(cè)。目前全球缺乏基因突變檢

5、測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)化規(guī)范，因此，尋找和建立一個(gè)低成本、高通量、簡(jiǎn)便易行、準(zhǔn)確可靠的檢測(cè)方法，推廣到臨床應(yīng)用，是一個(gè)亟待解決的問題。高分辨率熔解曲線分析法(K曲resolutionmelting，HRM)是在實(shí)時(shí)熒光定量PCR基礎(chǔ)上通過飽和染料監(jiān)控核酸的熔解曲線變化進(jìn)行分析的一種新興分子診斷技術(shù)。HRM檢測(cè)無需使用序列特異性探針，不受突變堿基位點(diǎn)和種類的局限，具有高靈敏度、高特異性、操作簡(jiǎn)便、低成本、高通量、閉管操作等優(yōu)點(diǎn)，可檢測(cè)石蠟包埋組織塊、血