K-ras、BRAF基因在結(jié)直腸癌中突變特征及其臨床意義.pdf

1、目的：研究K-ras、BRAF基因在結(jié)直腸癌中突變特征及其臨床意義。
　　方法：采用Real-time PCR法檢測(cè)412例結(jié)直腸癌組織K-ras、BRAF基因常見密碼子突變，免疫組織化學(xué)染色EliVisionTM plus二步法檢測(cè)結(jié)直腸癌中Ki-67、P53的表達(dá)，并分析其突變與Ki-67、P53等臨床病理學(xué)的關(guān)系。
　　結(jié)果：412例結(jié)直腸癌K-ras基因突變率為37.9％（156/412），單個(gè)位點(diǎn)突變率占35.4%

2、（146/412），兩個(gè)位點(diǎn)的突變率占2.2%（9/412），三個(gè)位點(diǎn)突變率占0.2%（1/412）。直腸癌的K-ras基因突變率45.2%（103/228）高于結(jié)腸癌28.8%（53/184）（P=0.001）。K-ras突變常見于12和13密碼子，其中12位密碼子占32.0%；13位密碼子占6.1%。突變方式以G>A為主，密碼子12突變表現(xiàn)為G12D（15.0%）、G12V（9.5%）、G12C（3.9%）、 G12S（2.9%）、

3、G12A（2.4%）和G12R（0.7%），密碼子13突變?yōu)镚13D（6.1%）。K-ras突變與性別、年齡、腫瘤大小、腫瘤大體類型、組織學(xué)分型以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床病理參數(shù)無(wú)關(guān)。（Ⅰ+Ⅱ）期結(jié)直腸癌K-ras基因突變率30.4%（62/204）低于（Ⅲ+Ⅳ）期(45.2%，94/208)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.002），基因位點(diǎn)突變分析發(fā)現(xiàn)G12V位點(diǎn)突變率在TNM分期（Ⅰ+Ⅱ）期的突變率（5.9%，12/204）低于（Ⅲ+Ⅳ）期

4、（13%，27/208），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.014）。結(jié)直腸癌中BRAF基因突變率2.4%（10/412），結(jié)腸癌中的BRAF基因的突變率（4.9%）高于直腸癌（0.4%），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.001）。結(jié)直腸癌K-ras基因突變與BRAF基因突變呈負(fù)相關(guān)（P=0.016，r=－0.124）。BRAF基因突變與術(shù)前血清CA199密切相關(guān)，其突變率隨著血清CA199水平的升高，BRAF基因突變率顯著升高（P=0.04）。

5、根據(jù)K-ras、BRAF基因在結(jié)直腸癌中的不同狀態(tài)將結(jié)直腸癌分為四種類型：Ⅰ型K-ras野生型—BRAF野生型占59.5%（245/412）；Ⅱ型K-ras野生型—BRAF突變型占2.4%(10/412)；Ⅲ型K-ras突變型—BRAF野生型占38.1(157/412)；Ⅳ型K-ras突變型—BRAF突變型占0%(0/412)。Ⅰ型中結(jié)腸癌占49.6%(122/246)低于直腸癌50.4%（124/246），差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；Ⅱ型中結(jié)腸

6、癌占90%（9/10）高于直腸癌10%（1/10），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；Ⅲ型中結(jié)腸癌占34.0%（53/156）低于直腸癌66%（103/156），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；本研究未發(fā)現(xiàn)有Ⅳ型的病例。K-ras、BRAF基因突變相關(guān)的結(jié)腸癌以Ⅱ型為主，直腸癌以Ⅲ型為主，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2檢驗(yàn)，P=0.001）。K-ras、BRAF不同基因狀態(tài)與P53、Ki67表達(dá)及性別、年齡、大體類型、組織學(xué)分型、腫瘤大小、

7、術(shù)前血CEA、CA199等臨床病理學(xué)無(wú)關(guān)（P＞0.05）。
　　結(jié)論：在結(jié)直腸癌中，K-ras基因突變以單個(gè)位點(diǎn)突變?yōu)橹鳎渲杏忠訥GT>GAT（G12D）最為常見。K-ras基因G12V位點(diǎn)突變可能與腫瘤進(jìn)展相關(guān)。直腸癌K-ras突變率高于結(jié)腸癌，而結(jié)腸癌中BRAF突變率高于直腸癌。K-ras、BRAF基因突變?cè)诮Y(jié)腸癌和直腸癌中的作用機(jī)制可能不同。根據(jù)K-ras、BRAF不同基因的分型有望為結(jié)直腸癌靶向治療的靶點(diǎn)選擇提供理論依據(jù)