結(jié)直腸癌患者血漿K-ras基因突變檢測的研究.pdf

1、目的:檢測結(jié)直腸癌患者血漿、腫瘤組織及正常人血漿中的K-ras基因突變,分析血漿K-ras基因突變與結(jié)直腸癌生物學特征之間的關系,初步判斷檢測結(jié)直腸癌血漿K-ras基因突變在結(jié)直腸癌診斷中的應用價值.方法:1.選擇42例結(jié)直腸癌患者及20例正常人作為研究對象.結(jié)直腸癌患者均經(jīng)手術及病理證實,20例正常人為住院檢查除外惡性腫瘤者及門診部分健康志愿者.2.結(jié)直腸癌患者(均于術前)及正常人抽取外周血3ml,放入試管中抗凝,離心,提取血漿1.5

2、ml,立即放入-80℃冰箱保存,結(jié)直腸癌患者術后留取新鮮腫瘤組織標本1×1×1cm3,亦放入-80℃冰箱保存?zhèn)溆?3.提取血漿及腫瘤組織DNA,選擇K-ras基因第12位密碼子位點進行PCR擴增,擴增產(chǎn)物變性,然后行變性聚丙烯酰胺凝膠電泳,最后銀染顯色.4.觀察記錄實驗結(jié)果.結(jié)果判斷:凡腫瘤組織出現(xiàn)與markerDNA 149bp平行的條帶,即認為無K-ras基因12密碼子突變;出現(xiàn)與markerDNA 149bp不平行的條帶,即認為有

3、K-ras基因12密碼子突變.凡血漿出現(xiàn)與markerDNA 143bp平行的條帶,即認為無K-ras基因12密碼子突變;出現(xiàn)與markerDNA 143bp不平行的條帶,即認為有K-ras基因12密碼子突變.5.進行統(tǒng)計學處理(卡方檢驗及列聯(lián)表卡方檢驗),分析血漿K-ras基因突變與結(jié)直腸癌的腫瘤部位、不同分化程度、不同臨床分期,有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間的關系,并與腫瘤組織、正常人血漿K-ras基因突變相比較,判斷檢測血漿K-ras基因突變