超敏肽核酸鉗制PCR技術(shù)檢測(cè)結(jié)直腸癌患者血漿PIK3CA基因突變.pdf

1、研究背景：結(jié)直腸癌(Colorectal cancer CRC)是全球常見(jiàn)的消化道惡性腫瘤之一，近幾年其發(fā)病率和死亡率呈上升趨勢(shì)，已成為嚴(yán)重威脅我國(guó)人民健康的主要腫瘤之一。PIK3CA基因突變(phosphatidylinositol-45-bisphosphate3-kinase,催化亞基α)已被證明與CRC的發(fā)生、發(fā)展和預(yù)后有相關(guān)性。然而，由于目前臨床的檢測(cè)方法靈敏度低，操作過(guò)程繁瑣，使得PIK3CA基因突變的檢測(cè)受到限制。

2、　　方法：我們建立了一個(gè)超敏感的肽核酸鉗制PCR技術(shù)(PNA-PCR技術(shù))去檢測(cè)血液游離DNA中 PIK3CA基因在第9、20外顯子發(fā)生的突變。而且，使用這種技術(shù)檢測(cè)128位結(jié)直腸癌患者血液PIK3CA基因突變狀態(tài)，與Sanger測(cè)序法對(duì)比，確定該技術(shù)的準(zhǔn)確度。此外，隨訪了6名接受靶向治療的CRC患者監(jiān)測(cè)PIK3CA基因突變狀態(tài)。
　　結(jié)果：PNA-PCR技術(shù)的敏感度高，在檢測(cè)第9和20外顯子時(shí)分別為0.1％和0.2%。當(dāng)128名

3、結(jié)直腸癌患者的血液PIK3CA基因突變狀態(tài)由PNA-PCR聯(lián)合Sanger測(cè)序進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，共有33名檢測(cè)到E545K位點(diǎn)突變，29名檢測(cè)到H1047R位點(diǎn)突變，這些病人中有13名是E545K和H1047R位點(diǎn)突變雙陽(yáng)性的，79位是兩突變位點(diǎn)雙陰性?？偠灾?，共有38.3%(49/128)的CRC患者發(fā)現(xiàn)E545K位點(diǎn)或H1047R位點(diǎn)至少一個(gè)位點(diǎn)存在突變。
　　患者的臨床參數(shù)，年齡(P=0.358)，性別(P=0.622)，疾病分

4、期(P=0.353)，疾病位置(P=0.307)及CEA狀態(tài)（P=0.414）等都與PIK3CA基因突變狀態(tài)沒(méi)有相關(guān)性。在連續(xù)監(jiān)測(cè)研究中，發(fā)現(xiàn)血液循環(huán)PIK3CA基因突變狀況是可以預(yù)測(cè)EGFR單抗療效的生物學(xué)標(biāo)志物。因此，在CRC患者治療過(guò)程中連續(xù)監(jiān)測(cè)PIK3CA基因突變情況，能夠指導(dǎo)患者正確的臨床用藥，使患者最大獲益。當(dāng)PIK3CA基因突變狀態(tài)只由PNA-PCR方法確定時(shí)，ΔCp值與突變DNA占DNA總量比率之間有良好的線性關(guān)系。PN