散發(fā)性結(jié)直腸癌的β-Catenin基因突變及表達(dá)和單細(xì)胞拉曼光譜研究.pdf

1、目的：(1)觀察β-Catenin基因在散發(fā)性結(jié)直腸癌(SCRC)中胞漿胞核異常表達(dá)特征及突變發(fā)生率并探討其I臨床病理相關(guān)性；(2)檢測SCRC標(biāo)本的微衛(wèi)星不穩(wěn)定(MSI)狀態(tài)，分析其與B-Catenin基因突變的關(guān)系；(3)檢測SCRC組織及癌旁正常粘膜中β-CateninmRNA的含量，探討其與SCRC中的β-Catenin蛋白異常表達(dá)以及臨床病理學(xué)指標(biāo)間的關(guān)系；(4)檢測SCRC單細(xì)胞的拉曼光譜，以便建立區(qū)分癌細(xì)胞和正常細(xì)胞的診斷

2、識別模型并分析生化改變。方法：(D用免疫組織化學(xué)EnVision二步法檢測了90例SCRC和22例散發(fā)性結(jié)直腸腺瘤標(biāo)本的β-Catenin基因在胞漿胞核中的異常表達(dá)。(2)以PCR擴增和直接測序檢測了上述標(biāo)本中β-Catenin基因第3外顯子突變。(3)用PCR擴增和毛細(xì)管電泳檢測Bat25和Bat26兩個微衛(wèi)星位點。(4)用Taq№n實時熒光定量PCR方法檢測了8l例SCRC組織和28例癌旁正常粘膜組織的β-CateninmRNA含量

3、。(5)應(yīng)用光鑷?yán)庾V技術(shù)(LTRS)檢測10例SCRC的單細(xì)胞和正常粘膜上皮單細(xì)胞的拉曼光譜，經(jīng)主元分析和邏輯回歸分析建立診斷識別模型。結(jié)果：(1)正常結(jié)直腸粘膜中β-Catenin表達(dá)定位于細(xì)胞膜上，未見胞漿胞核的異常表達(dá)。散發(fā)性結(jié)直腸腺瘤和腺癌組織出現(xiàn)胞漿和胞核的異常表達(dá)，膜表達(dá)有不同程度的降低。在SCRC中β-Catenin的胞漿和胞核表達(dá)率(分別為88．9％和41.1％)顯著高于散發(fā)性結(jié)直腸腺瘤(分別為59．1％和18．2％

4、)(P<0．05)。SCRC的B-Catenin異常胞漿表達(dá)與腫瘤生長方式、分化程度相關(guān)，陽性表達(dá)率在潰瘍型和浸潤型生長、高中分化腺癌分別高于隆起型生長、低分化腺癌(P<0.05)。SCRC的B-Catenin核表達(dá)率在浸潤型和潰瘍型生長(50。0％)高于在隆起型生長(26。5％)(P<0。05)。核表達(dá)多為灶性分布，主要在腫瘤浸潤前沿呈陽性表達(dá)。(2)90例SCRC標(biāo)本中僅有1例在β-Catenin第3外顯子發(fā)生點突變，為雜合性突變，

5、即41密碼子ACC→GCC，蘇氨酸變成丙氨酸，突變率約1％。22例散發(fā)性腺瘤未發(fā)現(xiàn)第3外顯子突變。(3)90例SCRC標(biāo)本中有8例表現(xiàn)高度微衛(wèi)星不穩(wěn)定(MSI—m，發(fā)生率為9％(8/90)，其中一例為β-Catenin突變，而微衛(wèi)星穩(wěn)定(MSS)病例中未檢測到突變。(4)在散發(fā)性結(jié)直腸癌組織中β-CateninmR№含量(2.5267±2.2839)低于癌旁正常粘膜組織中的含量(5.0029±3.3264)，差別有顯著性意義。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移

6、組的B-CateninmRNA含量(1.8266±1.2883)低于淋巴結(jié)無轉(zhuǎn)移組(3.3592±2.8805)，P

7、的診斷識別模型，其診斷識別的敏感度和特異度分別達(dá)到92.5％和82.5％。光譜分析結(jié)果顯示，癌細(xì)胞中核酸和蛋白質(zhì)水平高于正常細(xì)胞，而脂質(zhì)含量低于正常細(xì)胞。 結(jié)論： L在SCRC中B-Catenin胞漿及核內(nèi)異常表達(dá)率達(dá)率分別為88.9％和4L1％，其胞漿胞核異常表達(dá)率只與結(jié)直腸癌的發(fā)生階段、生長方式及分化程度相關(guān)。B-Catenin胞核異常表達(dá)往往出現(xiàn)在腫瘤的浸潤前沿，可能與癌腫的侵襲行為有關(guān)。 2．在SCRC中

8、β-Catenin突變率很低，推測在SCRC中β-Catenin突變不是B—Catenin胞漿胞核異常表達(dá)的主要原因；伴MSI-H的SCRC可能易發(fā)生B—Catenin突變。 3．在SCRC中β-CateninmRNA的含量顯著低于正常結(jié)直腸粘膜中的含量，可能是一種負(fù)反饋調(diào)節(jié)機制所致。SCRC中β-Catenin的胞漿胞核異常表達(dá)與β—CateninmRNA轉(zhuǎn)錄水平無明顯關(guān)聯(lián)。 4．β-CateninmRNA含量降低與淋