PNA-鉗制熒光PCR法檢測結(jié)直腸癌K-ras基因突變的實驗研究.pdf

1、目的:對比評價直接測序法（Sanger法）和PNA-鉗制熒光PCR法檢測結(jié)直腸癌及癌旁組織K-ras基因突變的效果，檢測結(jié)直腸癌患者血清中K-ras基因突變的臨床應用前景，探討K-ras基因突變與結(jié)直腸癌臨床病理因素的關系。
　　方法:收集2012年1月至2012年12月在中南大學湘雅醫(yī)院胃腸外科手術切除的結(jié)直腸癌新鮮組織、相對應癌旁組織及術前外周血血清各35例，采用試劑盒法提取DNA，分別采用Sanger測序法和肽核酸(PNA)

2、-鉗制熒光PCR（TaqMan-MGB探針法）檢測K-ras基因外顯子2中第12、13編碼子上最常見的7種突變類型，結(jié)合其臨床資料對檢測結(jié)果進行比較分析。
　　結(jié)果:(1)應用Sanger測序法可在35例結(jié)直腸癌組織標本中檢出9例，陽性率為25.7％，其中第12密碼子突變7例，包括3例35G＞A、3例35G＞T和1例34G＞T，第13密碼子突變（即38G＞A）2例;35例結(jié)直腸癌旁組織均未檢出突變。應用PNA-鉗制熒光PCR在35

3、例結(jié)直腸癌原發(fā)灶組織中檢出14例，陽性率為40.0％，兩者差異具有統(tǒng)計學意義(P=0.0313)。35例結(jié)直腸癌旁組織也檢出2例突變，但突變比例明顯低于其相應的癌組織。
　　(2)35例結(jié)直腸癌患者外周血血清中應用PNA-鉗制熒光PCR法檢出4例，陽性率為11.4％，與用PNA-鉗制熒光PCR法檢測腫瘤組織K-ras基因突變結(jié)果比較，應用Kappa一致性檢驗，Kappa值為0.189。
　　(3) K-ras基因突變率與結(jié)直

4、腸癌患者年齡、性別、組織學類型、腫瘤部位以及TNM分期無明顯相關性。
　　結(jié)論:
　　(1)應用PNA-鉗制熒光PCR檢測結(jié)直腸癌患者K-ras基因突變率相對于直接測序法（Sanger法）陽性檢出率高，方法簡便，適合在臨床推廣。
　　(2)應用PNA-鉗制熒光PCR法檢測結(jié)直腸癌患者血清與腫瘤組織中K-ras基因狀態(tài)結(jié)果比較，二者一致性較差。
　　(3)本研究發(fā)現(xiàn)臨床病理因素與K-ras基因突變之間無明顯相關性。