EGFR酪氨酸激酶抑制劑吉非替尼聯(lián)合芳香化酶抑制劑阿那曲唑?qū)Ψ切〖毎伟┘毎膶嶒炑芯?pdf

1、目的：研究發(fā)現(xiàn)，表皮生長因子受體（EGFR）信號通路和雌激素受體（ER）信號通路都與腫瘤的生物學(xué)行為有密切聯(lián)系，且兩通路還存在信號交互作用，對非小細胞肺癌的生物學(xué)行為有重要影響。故在肺癌治療中，ER和EGFR兩條通路的雙重抑制可能具有協(xié)同抗腫瘤作用。我們前期工作已用Real-time PCR 以及Western blot的方法從非小細胞肺癌細胞株A549、H460、SPC-A-1、H1299中篩檢出ER（ER-α, ER-β）表達水平最

2、高的細胞株A549。在此基礎(chǔ)上，本研究旨在探討EGFR酪氨酸激酶抑制劑（吉非替尼）聯(lián)合芳香化酶抑制劑（阿那曲唑）作用于肺腺癌細胞株A549后，對其細胞增殖、細胞凋亡，細胞周期分布以及相關(guān)信號通路蛋白表達水平的影響，并探討其相應(yīng)的分子機制，為靶向治療聯(lián)合內(nèi)分泌治療在非小細胞肺癌領(lǐng)域中的應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。
　　 方法：采用免疫組化方法驗證A549細胞株的ER（ER-α，ER-β）以及EGFR的表達水平，并進行細胞定位。然后將阿那曲唑

3、、吉非替尼單獨或聯(lián)合作用于A549細胞株24小時,48小時,72小時后，用倒置顯微鏡觀察各組細胞的形態(tài)學(xué)變化，CCK8法檢測各組細胞的增殖抑制情況，PI單染分析各組細胞周期分布情況，Annexin V/PI雙染檢測各組細胞凋亡情況。Western blot檢測兩種藥物對EGFR信號通路中EGFR，ERK，AKT表達水平以及EGFR，ERK，AKT磷酸化水平的影響。
　　 結(jié)果：肺腺癌細胞株A549存在ER（ER-α，ER-β）以

4、及EGFR表達，ER-α主要在細胞漿內(nèi)表達。ER-β主要在細胞漿內(nèi)表達，少量在細胞核中表達。EGFR主要在胞膜和胞漿中表達。單藥阿那曲唑與單藥吉非替尼對A549細胞的作用均呈時間及濃度依賴性。作用24小時，48小時，72小時后，與阿那曲唑或吉非替尼單獨作用相比，兩藥聯(lián)合可以增加A549細胞的增殖抑制率（P<0.05）及細胞的凋亡比例（P<0.05）。細胞周期檢測提示與兩藥單獨作用相比，兩藥聯(lián)合可以將更多的細胞阻滯在GO/G1期（P<0.