PPARγ激動(dòng)劑和全反式維甲酸對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化的影響.pdf

1、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?
　　研究PPARγ激動(dòng)劑和全反式維甲酸對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞骨向分化的影響及可能機(jī)制。
　　實(shí)驗(yàn)方法:
　　采用化學(xué)發(fā)光法、PCR、Western blot、報(bào)告質(zhì)粒等技術(shù)，研究PPARγ受體激動(dòng)劑曲格列酮與全反式維甲酸對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞骨向分化的影響。具體方法如下:
　　1.檢測(cè)單獨(dú)及聯(lián)合使用曲格列酮(Tro)和/或全反式維甲酸(ATRA)后，早期成骨指標(biāo)堿性磷酸酶（alkaline phosphatase，A

2、LP）的活性變化。
　　2.檢測(cè)單獨(dú)及聯(lián)合使用Tro和/或ATRA后，礦化基質(zhì)沉積的變化。
　　3.從基因表達(dá)水平和蛋白質(zhì)表達(dá)水平檢測(cè)單獨(dú)及聯(lián)合使用Tro和/或ATRA后，MEFs細(xì)胞成骨晚期指標(biāo)骨橋素(osteopontin，OPN)，骨鈣素(osteocalcin, OC)的表達(dá)情況。
　　4.利用重組腺病毒技術(shù)，過(guò)表達(dá)及干擾PPARγ2基因，檢測(cè)Tro和/或ATRA對(duì)MEFs細(xì)胞堿性磷酸酶活性的影響。
　　

3、5.利用報(bào)告質(zhì)粒及Western blot，檢測(cè)使用Tro和/或ATRA對(duì)BMPR-Smad信號(hào)通路轉(zhuǎn)錄活性的影響。
　　6.利用Oil-red染色及Western blot，檢測(cè)Tro和/或ATRA對(duì)MEFs細(xì)胞成脂分化的影響。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果:
　　1.Tro和ATRA聯(lián)合應(yīng)用增強(qiáng)MEFs細(xì)胞ALP活性。
　　2.Tro和ATRA聯(lián)合應(yīng)用增強(qiáng)MEFs細(xì)胞礦化基質(zhì)沉積。
　　3.Tro和ATRA聯(lián)合應(yīng)用增加

4、MEFs細(xì)胞OPN及OC的表達(dá)。
　　4.過(guò)表達(dá)PPARγ2基因，可以增強(qiáng)Tro和ATRA聯(lián)合誘導(dǎo)的MEFs細(xì)胞ALP活性。
　　5.Tro和ATRA聯(lián)合應(yīng)用能激活BMPR-Smad信號(hào)通路。
　　6.Tro和ATRA聯(lián)合應(yīng)用能抑制Tro誘導(dǎo)MEFs細(xì)胞成脂分化。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)論:
　　Tro與ATRA聯(lián)合應(yīng)用能明顯誘導(dǎo)MEFs細(xì)胞成骨分化。這種作用可能與增強(qiáng)BMPR-Smad信號(hào)轉(zhuǎn)錄活性及抑制MEFs細(xì)胞成