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1、目的： 從形態(tài)學(xué)、標(biāo)志物蛋白合成(LPL 、ALP、OCN)的角度，分別觀察補(bǔ)腎法、化痰法、補(bǔ)腎化痰法對(duì)BMSCs成脂分化和成骨分化的影響，探討補(bǔ)腎化痰法治療骨質(zhì)疏松癥的可能作用機(jī)制． 方法： 1.運(yùn)用全骨髓貼壁法分離培養(yǎng)純化Wsitar大鼠BMSCs. 2.從細(xì)胞形態(tài)學(xué)、流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞表面抗原等角度進(jìn)行鑒定BMSCs． 3.使用1μmol/L_，地塞米松、0.5mmol/L IBMX、0.2
2、mmol/L 吲哚美辛、10μg/mL胰島素聯(lián)合誘導(dǎo)BMSCs成脂分化，通過(guò)細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察、油紅O染色及定量和用RT-PCR檢測(cè)脂蛋白脂酶(LPL)mRNA表達(dá)，探討補(bǔ)腎中藥、化痰中藥和補(bǔ)腎化痰中藥分別對(duì)BMSCs成脂分化的影響。 4.使用0.1μmol/L地塞米松，10 mmol/L β-甘油磷酸鈉，50μg/mL Vitamin C聯(lián)合誘導(dǎo)BMSCs成骨分化，通過(guò)檢測(cè)茜素紅染色及定量、堿性磷酸酶(ALP)活性和骨鈣素(OCN
3、) mRNA表達(dá)，探討補(bǔ)腎中藥、化痰中藥和補(bǔ)腎化痰中藥對(duì)BMSCs成骨分化的影響． 結(jié)果： 1.采用全骨髓貼壁法可穩(wěn)定獲得均質(zhì)性良好的大鼠BMSCs。 2.流式細(xì)胞儀檢測(cè)大鼠BMSCs表面標(biāo)志抗原CD29、CD44表達(dá)陽(yáng)性，CD45表達(dá)陰性． 3.化痰中藥能使BMSCs誘導(dǎo)形成的脂肪細(xì)胞減少，并下調(diào)成脂相關(guān)基因LPL-mRNA表達(dá)。 4.補(bǔ)腎化痰中藥能促進(jìn)BMSCs成骨誘導(dǎo)后細(xì)胞體外鈣化，提高細(xì)胞
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