胃癌相關(guān)miRNA的初步鑒定及絲裂霉素對(duì)胃癌細(xì)胞miRNA表達(dá)譜的影響.pdf

1、目的：本研究通過鑒定與不同分化程度人胃癌細(xì)胞株密切相關(guān)的miRNA，探討了胃癌可能的發(fā)病機(jī)制；并初步分析絲裂霉素（MMC）對(duì)胃癌細(xì)胞miRNA表達(dá)譜的影響，為進(jìn)一步探討MMC治療胃癌的分子機(jī)制奠定一定的理論基礎(chǔ)。
　　方法：體外培養(yǎng)中分化人胃癌細(xì)胞株SGC-7901、低分化人胃癌細(xì)胞株MKN-45及正常胃粘膜上皮細(xì)胞GES-1，使用MTT法檢測SGC-7901增殖情況，根據(jù)MTT的結(jié)果計(jì)算出MMC的IC50濃度來干預(yù)SGC-790

2、1；提取各樣本總RNA，并驗(yàn)證RNA質(zhì)量，利用miRNA芯片技術(shù)，分別檢測分析SGC-7901，MKN-45差異表達(dá)的miRNA，及用藥物干預(yù)后SGC-7901差異表達(dá)的miRNA；采用實(shí)時(shí)定量RT-PCR對(duì)部分miRNA進(jìn)行驗(yàn)證；運(yùn)用DIANAmT，miRanda，miRDB，miRWalk，PICTAR4，PITA，RNA22，RNAhybrid及Targetscan軟件預(yù)測miRNA-498可能調(diào)控的靶基因。
　　結(jié)果：1.

3、與正常胃粘膜細(xì)胞GES-1相比，胃癌細(xì)胞株SGC-7901及MKN-45中有119個(gè)miRNA存在兩倍及以上差異表達(dá)，其中SGC-7901有30個(gè)miRNA表達(dá)上調(diào)，25個(gè)miRNA表達(dá)下調(diào)；MKN-45有58個(gè)miRNA表達(dá)上調(diào)，33個(gè)miRNA表達(dá)下調(diào);MKN-45與SGC-7901的miRNA表達(dá)譜有明顯差異。2.MMC與SGC-7901細(xì)胞生長抑制率之間有濃度依賴關(guān)系，MMC48h的IC50為1.33μmol/L；MMC的IC5

4、0干預(yù)48h后的SGC-7901細(xì)胞與干預(yù)前SGC-7901細(xì)胞比較，存在60個(gè)差異表達(dá)的miRNA，其中miR-498、miR-1247等11個(gè)miRNA的表達(dá)明顯上調(diào)，而在胃癌中的表達(dá)明顯下調(diào)，另外miR-205*，miR-39242個(gè)明顯下調(diào)的miRNA，在胃癌中的表達(dá)卻是明顯上調(diào)的。3.選取miR-33b，miR-498,miR-7,miR-185,miR-3924進(jìn)行實(shí)時(shí)定量RT-PCR驗(yàn)證，其結(jié)果與芯片結(jié)果一致，證明miRN

5、A芯片結(jié)果可靠。4．DIANAmT，miRanda，miRDB，miRWalk，PICTAR4，PITA，RNA22，RNAhybrid和Targetscan軟件分析顯示癌基因MDTH為miR-498的靶基因之一。
　　結(jié)論：1.胃癌細(xì)胞中存在差異表達(dá)的miRNA，且分化程度不同的胃癌細(xì)胞中亦存在差異表達(dá)的miRNA；2.MMC可以改變SGC-7901細(xì)胞中部分miRNA的表達(dá)水平；3.MMC對(duì)包括miR-498在內(nèi)的這些miRN