胃癌相關(guān)miRNA的鑒定及miR-7在胃癌組織中的表達(dá).pdf

1、目的：本研究通過鑒定與人胃癌密切相關(guān)的miRNA，探討胃癌可能的發(fā)病機(jī)制，并初步篩選出不同分化程度胃癌細(xì)胞株miRNA差異表達(dá)譜，為進(jìn)一步研究胃癌發(fā)生、發(fā)展的機(jī)制以及發(fā)現(xiàn)胃癌診斷和治療相關(guān)的分子標(biāo)志物奠定基礎(chǔ)。
　　方法：1.體外培養(yǎng)高分化人胃癌細(xì)胞株NCI-N87、低分化人胃癌細(xì)胞株MGC-803和正常胃黏膜上皮細(xì)胞GES-1，分別提取以上各種人胃癌細(xì)胞株和正常胃黏膜上皮細(xì)胞中總RNA，應(yīng)用miRNA芯片技術(shù)篩選差異表達(dá)的miR

2、NA，然后采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)驗(yàn)證部分芯片結(jié)果。2.選定特定的miRNA,采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)驗(yàn)證其在27例胃癌及其配對(duì)非腫瘤組織中的表達(dá)。
　　結(jié)果：1.miRNA芯片檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與正常胃粘膜細(xì)胞GES-1相比，胃癌細(xì)胞株NCI-N87及 MGC-803中共有147個(gè)miRNAs存在兩倍及以上差異表達(dá)，其中NCI-N87中有54個(gè)miRNAs表達(dá)上調(diào)，58個(gè)miRNAs表達(dá)下調(diào)；MGC-803中有42個(gè)miRNAs

3、表達(dá)上調(diào)，33個(gè)miRNAs表達(dá)下調(diào)。選取在這兩種細(xì)胞中均上調(diào)表達(dá)的miR-16及下調(diào)表達(dá)的miR-7、miR-185進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR驗(yàn)證，證明芯片結(jié)果基本可信。2.芯片結(jié)果提示部分病毒相關(guān)miRNA在胃癌細(xì)胞與正常胃粘膜細(xì)胞中差異表達(dá)，如kshv-miR-K12-12*、ebv-miR-BART19-3p、hsv1-miR-H7*等。3.對(duì)27例患者胃癌及癌旁非腫瘤組織miR-7表達(dá)量的研究發(fā)現(xiàn)，相比于配對(duì)癌旁非腫瘤組織，19例

4、患者胃癌組織中 miR-7表達(dá)量下調(diào)，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示該差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=-2.809，P<0.05)，說明miR-7在胃癌組織中的表達(dá)較配對(duì)非腫瘤組織下調(diào)。
　　結(jié)論：1.初步篩選出147個(gè)人胃癌相關(guān) miRNAs，并且不同分化程度的胃癌細(xì)胞株存在特異的miRNA表達(dá)譜，為建立一種新的以miRNA為基礎(chǔ)的診斷和治療胃癌的方法提供了相關(guān)信息。2.病毒相關(guān)miRNA在胃癌細(xì)胞株與正常胃粘膜細(xì)胞中差異表達(dá)，提示部分病毒miRNA也