人偏肺病毒感染后Toll樣受體的表達(dá)及功能.pdf

1、第一部分：
　　 目的：觀察人偏肺病毒感染人肺上皮細(xì)胞后Toll樣受體表達(dá)變化及其信號通路的功能,探討hMPV誘導(dǎo)氣道炎癥的部分機(jī)制。
　　 方法：hMPV感染體外培養(yǎng)的人肺上皮細(xì)胞株A549,檢測病毒在A549細(xì)胞中的生長曲線,并通過RT-PCR,real-time RT-PCR方法檢測細(xì)胞TLRs mRNA的表達(dá),ELISA檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清干擾素-α及腫瘤壞死因子-α的表達(dá)。
　　 結(jié)果：(1)hMPV可在A

2、549細(xì)胞中復(fù)制,感染后3天達(dá)高峰105.2TCID50/mL。(2)RT-PCR結(jié)果提示:hMPV感染A549細(xì)胞6小時后大部分TLRs的表達(dá)均上調(diào)。(3)定量PCR結(jié)果提示:hMPV感染A549細(xì)胞后TLR3-4,TLR7-9的表達(dá)增高,且有時間依賴性,而紫外滅活的hMPV刺激細(xì)胞后TLRs表達(dá)無明顯變化。(4)ELISA結(jié)果提示hMPV感染后24小時,IFN-α及TNF-α的表達(dá)均明顯升高。
　　 結(jié)論：人偏肺病毒感染A5

3、49細(xì)胞后可上調(diào)Toll樣受體表達(dá),其誘導(dǎo)的炎性反應(yīng)與部分Toll樣受體介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑有關(guān)。
　　 第二部分：
　　 目的：探討人偏肺病毒感染BALB/c小鼠后肺組織Toll樣受體表達(dá)變化及PolyI:C對病毒復(fù)制的影響。
　　 方法：實(shí)驗(yàn)分為hMPV感染組、PolyI:C+hMPV組、polyI:C+DMEM組、DMEM對照組,均于滴鼻后1、3、5、7、9、16天處死小鼠,取肺組織用于病毒滴度測定,病理檢查

4、,通過RT-PCR,real-time RT-PCR方法檢測小鼠肺組織TLRs mRNA的表達(dá)。
　　 結(jié)果：(1)PolyI:C+hMPV組與hMPV感染組相比,病毒在小鼠肺內(nèi)復(fù)制水平明顯減低,僅在感染后第5天及第7天檢測到病毒；病理結(jié)果亦提示肺部炎癥明顯減輕。(2)RT-PCR結(jié)果提示:hMPV感染組小鼠與DMEM對照組相比,肺組織內(nèi)大部分TLRs mRNA表達(dá)均升高。(3)real-time PCR結(jié)果提示:hMPV感染后