2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:探討大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)的分離、培養(yǎng)、凍存、復(fù)蘇辦法,比較MSCs在平面條件和在三維支架下向軟骨細(xì)胞誘導(dǎo)的差異,細(xì)胞增殖力、細(xì)胞周期的變化,以及在裸鼠體內(nèi)構(gòu)建組織工程軟骨的可能性。方法:采用梯度離心法和貼壁培養(yǎng)法分離MSCs,對(duì)所分離細(xì)胞進(jìn)行SH3免疫組化鑒定,用含70%DMEM培養(yǎng)基、20%FBS、10%DMSO組成的凍存液在4℃、-70℃、-196℃的分階段降溫凍存MSCs,及快速復(fù)蘇。用TGF-β1為主的誘導(dǎo)因子

2、在平面條件下或在膠原、明膠支架上將MSCs向軟骨細(xì)胞誘導(dǎo),觀察細(xì)胞在材料上的貼附率,對(duì)誘導(dǎo)細(xì)胞行Ⅱ型膠原免疫組化、原位雜交檢測(cè),MTT法和流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞增殖力、細(xì)胞周期變化。將誘導(dǎo)后細(xì)胞與膠原海綿、藻酸鹽凝膠復(fù)合,植入裸鼠體內(nèi),4w、8w檢測(cè)體內(nèi)組織工程軟骨的形成情況。結(jié)果:使用以上兩種分離方法分離出MSCs,經(jīng)SH3免疫組化鑒定,復(fù)合MSCs的特征,P1、P5代凍存和復(fù)蘇細(xì)胞數(shù)成活率在85%以上,使用的以TGF-β1為主的誘導(dǎo)因子

3、,在平面條件下或在膠原、明膠支架上將MSCs向軟骨細(xì)胞誘導(dǎo),Ⅱ型膠原免疫組化、原位雜交檢測(cè)均為陽性。MSCs在膠原支架上分泌Ⅱ型膠原數(shù)量、細(xì)胞增殖力、細(xì)胞數(shù)均比平面誘導(dǎo)條件下高,MSCs在膠原支架上生長,細(xì)胞周期與平面誘導(dǎo)條件下相比未發(fā)生明顯改變,細(xì)胞無畸變、瘤變傾向,細(xì)胞凋亡數(shù)比平面誘導(dǎo)時(shí)減少。誘導(dǎo)后的MSCs細(xì)胞與膠原海綿、藻酸鹽凝膠復(fù)合,在裸鼠體內(nèi)可形成類軟骨樣組織。 結(jié)論:采用梯度離心法和貼壁培養(yǎng)法可有效分離出MSCs,本實(shí)

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