骨髓間充質(zhì)干細胞構(gòu)建組織工程化肝臟.pdf

1、目的：體外分離培養(yǎng)大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞(BMSCs)并予HGF、FGF-4誘導，結(jié)合組織工程材料PGA支架培養(yǎng)后回植于肝切模型，構(gòu)建組織工程化肝臟組織，探討以骨髓間充質(zhì)干細胞構(gòu)建組織工程化肝臟的可行性。 方法：分離SD大鼠的BMSCs，鑒定后加HGF、FGF-4為主要誘導因子的誘導液成肝樣細胞誘導培養(yǎng)，對誘導組細胞進行細胞形態(tài)觀察及功能表達檢測。綠色熒光蛋白(GFP)基因轉(zhuǎn)染BMSCs以示蹤。BMSCs接種于PGA，體外繼續(xù)誘導

2、培養(yǎng)2w后將細胞-PGA復合物回植入肝衰竭模型肝臟及腹腔內(nèi)，對照組行單純1/3肝切。分別于回植后14d、28d及56d，對回植物進行大體觀察，回植后第56d取新生肝臟組織行冰凍切片、HE染色等組織學觀察，免疫組化檢測新生組織ALB、CK18及AFP的蛋白質(zhì)合成；RT-PCR檢測aFP、ALB、CK18的mRNA表達。 結(jié)果：分離取得BMSCs貼壁生長，經(jīng)FACS檢測CD34陰性、CD105陽性；BMSCs成骨誘導檢測鈣結(jié)節(jié)、AK

3、P、OCN陽性；成脂肪誘導細胞油紅0染色陽性；成軟骨表達誘導II型膠原。誘導組在培養(yǎng)第14天細胞分布呈典型的鋪路石狀；在培養(yǎng)的第7、14、21d，誘導組細胞ALB免疫組化染色和aFP、ALB、CK18的mRNA檢測均為陽性。細胞—PGA復合物回植后第56天，PGA降解完全。冰凍切片示GFP陽性提示新生肝臟來源于細胞—PGA回植物。新生肝臟組織ALB、CK18表達陽性，AFP表達陰性，細胞功能與對照組比較無顯著差異。 結(jié)論：骨髓間