2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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1、由創(chuàng)傷、感染、腫瘤、燒傷等引起的大塊骨缺損是臨床治療的棘手問(wèn)題,采用傳統(tǒng)的自體骨或同種異體骨移植及生物材料填充,由于存在種種弊端,治療效果均不理想,嚴(yán)重限制了其臨床應(yīng)用。組織工程技術(shù)的興起為解決這一難題帶來(lái)了希望,成為當(dāng)前的研究熱點(diǎn)。然而,大塊組織工程骨血管化以及生長(zhǎng)因子持續(xù)穩(wěn)定的釋放等關(guān)鍵性技術(shù)難題至今未找到理想的解決辦法。顯然,采用常規(guī)的思路對(duì)大塊骨缺損進(jìn)行修復(fù)遇到了巨大的挑戰(zhàn)。為了找到一條可供臨床用來(lái)修復(fù)大塊骨缺損的組織工程之路,

2、本研究力圖探索出一條基于整體論和還原論相結(jié)合的骨組織工程研究的創(chuàng)新之路,并率先建立近同構(gòu)模型——體內(nèi)灌注誘導(dǎo)成骨微環(huán)境系統(tǒng)?;谶@種認(rèn)識(shí),開(kāi)展了以下一系列研究: 第1章山羊骨髓基質(zhì)干細(xì)胞的體外培養(yǎng) 目的:將來(lái)源于山羊的骨髓基質(zhì)干細(xì)胞(BMSC),在特定的條件下定向誘導(dǎo)分化為成骨細(xì)胞,觀察其生物學(xué)特性,探討其作為骨組織工程種子細(xì)胞的可行性和應(yīng)用價(jià)值。 方法:抽取健康山羊骨髓采用全骨髓法進(jìn)行培養(yǎng)擴(kuò)增,傳代后改用含地塞

3、米松(10-8mol/L),β-甘油磷酸鈉(10mmol/L)和維生C(50mg/L)的條件培養(yǎng)基促使其向成骨細(xì)胞定向誘導(dǎo)分化。在相差顯微鏡、HE染色、光鏡下觀察細(xì)胞形態(tài),并測(cè)定培養(yǎng)細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線(MTT法),流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行細(xì)胞表面特征鑒定,Gomori鈣鉆法進(jìn)行ALP染色、Von Kossa法進(jìn)行鈣結(jié)節(jié)染色,同時(shí)測(cè)定細(xì)胞內(nèi)ALP含量變化。 結(jié)果:原代和傳代培養(yǎng)的細(xì)胞具有活躍的增殖能力。誘導(dǎo)培養(yǎng)2-3周后,細(xì)胞生長(zhǎng)良好,生化指標(biāo)

4、穩(wěn)定,光鏡下表現(xiàn)出與典型的成骨細(xì)胞相似的形態(tài)特征。流式細(xì)胞術(shù)證明BMSC細(xì)胞膜抗原CD29,CD44,CD105表達(dá)陽(yáng)性,而CD14,CD34和HLA-DR表達(dá)陰性,ALP及鈣結(jié)節(jié)染色等均為強(qiáng)陽(yáng)性;ALP活性明顯增強(qiáng)。 結(jié)論:山羊BMSC取材安全方便,在特定條件誘導(dǎo)下,可定向誘導(dǎo)分化為具有典型形態(tài)學(xué)特點(diǎn)和功能的成骨細(xì)胞,山羊BMSC可作為理想的骨組織工程種子細(xì)胞來(lái)源。 第2章rhBMP-2及rhbFGF對(duì)山羊骨髓基質(zhì)干細(xì)

5、胞增殖的效應(yīng) 目的:檢測(cè)hBMP-2和hbFGF單獨(dú)及聯(lián)合作用對(duì)山羊骨髓基質(zhì)干細(xì)胞(BMSC)增殖的效應(yīng)。 方法:采用MTT法檢測(cè)單獨(dú)及聯(lián)合施加rhBMP-2和rhbFGF后,BMSC在第1,3,5,7及10天增殖的狀況,并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 結(jié)果:rhBMP-2和hbFGF均能顯著地促進(jìn)BMSC的增殖,并呈劑量依賴性。兩種生長(zhǎng)因子聯(lián)合作用的效應(yīng)高于單獨(dú)作用的效應(yīng)。 結(jié)論:rhBMP-2和hbFGF具有協(xié)同

6、促進(jìn)山羊BMSC增殖的效應(yīng)。 第3章rhBMP-2及rhbFGF對(duì)山羊骨髓基質(zhì)干細(xì)胞分化的效應(yīng) 目的:檢測(cè)rhBMP-2和rhbFGF單獨(dú)及聯(lián)合作用對(duì)山羊BMSC的分化效應(yīng)。 方法:采用堿性磷酸酶(ALP)檢測(cè)試劑盒及考馬斯亮蘭測(cè)定法檢測(cè)單獨(dú)及聯(lián)合施加rhBMP-2和rhbFGF后,BMSC在第2,5,7及10天時(shí)的ALP活性及蛋白質(zhì)含量水平以反映對(duì)細(xì)胞分化作用的影響,并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 結(jié)果:rhBMP

7、-2能在較長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)明顯促進(jìn)細(xì)胞ALP活性及蛋白質(zhì)含量,而rhbFGF則起到抑制作用,且均呈劑量依賴性。rhBMP-2單獨(dú)作用與兩種生長(zhǎng)因子聯(lián)合作用的效應(yīng)相近,均高于hbFGF單獨(dú)作用的效應(yīng)。 結(jié)論:rhBMP-2和hbFGF聯(lián)合應(yīng)用與rhBMP-2單獨(dú)使用均能夠顯著地促進(jìn)山羊BMSC的分化效應(yīng)。 第4章增強(qiáng)型綠色熒光蛋白基因質(zhì)粒轉(zhuǎn)染骨髓基質(zhì)干細(xì)胞 目的:探討以脂質(zhì)體介導(dǎo)法轉(zhuǎn)染的增強(qiáng)型綠色熒光蛋白質(zhì)粒作為骨組織工程

8、種子細(xì)胞示蹤劑的可行性。 方法:選取12月齡中國(guó)青山羊2只作為BMSC供體。將已轉(zhuǎn)染pEGFP—N2的大腸桿菌109菌種,進(jìn)行質(zhì)粒提取并經(jīng)Ava Ⅱ酶切鑒定。脂質(zhì)體(lipofectamine 2000)介導(dǎo)轉(zhuǎn)染羊BMSC細(xì)胞。分別于轉(zhuǎn)染24h、6月后計(jì)算熒光的轉(zhuǎn)染效率。以未標(biāo)記的同期細(xì)胞作對(duì)照。 結(jié)果:質(zhì)粒經(jīng)酶切后電泳,可見(jiàn)三條帶,分別為445bp,1938bp,2354bp,確定所提質(zhì)粒為pEGFP—N2。轉(zhuǎn)染24h

9、后綠色熒光表達(dá)率35%;經(jīng)G418篩選,轉(zhuǎn)染6個(gè)月后綠色熒光表達(dá)率75%,同時(shí)對(duì)照組未觀察到綠色熒光。 結(jié)論:脂質(zhì)體介導(dǎo)法轉(zhuǎn)染的。pEGFP—N2標(biāo)記BMSC,是一種理想的標(biāo)記方法。 第5章增強(qiáng)型綠色熒光蛋白基因質(zhì)粒標(biāo)記技術(shù)示蹤組織工程化骨形成 目的:探討以脂質(zhì)體介導(dǎo)法轉(zhuǎn)染的增強(qiáng)型綠色熒光蛋白質(zhì)粒作為骨組織工程種子細(xì)胞示蹤組織工程化骨形成的可行性。 方法:將標(biāo)記與未標(biāo)記細(xì)胞經(jīng)成骨誘導(dǎo)分化后,檢測(cè)堿性磷酸酶

10、(ALP)活性和四環(huán)素鈣結(jié)節(jié)染色,以未標(biāo)記的同期細(xì)胞作對(duì)照。將標(biāo)記細(xì)胞接種于珊瑚支架,形成BMSC-珊瑚復(fù)合物,分別于體外培養(yǎng)4d、7d、14d后進(jìn)行電鏡掃描觀察。將體外培養(yǎng)7d的BMSC-珊瑚復(fù)合物移植于裸鼠皮下,8周后取出,熒光顯微鏡下進(jìn)行示蹤觀察,HE染色觀察組織結(jié)構(gòu)。以未標(biāo)記的BMSC-珊瑚復(fù)合物、單純珊瑚作對(duì)照。 結(jié)果:與對(duì)照組相比,標(biāo)記細(xì)胞堿性磷酸酶活性差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,均具有鈣結(jié)節(jié)形成能力。標(biāo)記細(xì)胞與珊瑚材料貼附生

11、長(zhǎng)良好,并分泌膠原纖維及鈣鹽結(jié)晶樣基質(zhì)。組織學(xué)示新生骨樣組織圍繞材料孔隙生成;新生組織細(xì)胞內(nèi)有綠色熒光清晰表達(dá),同時(shí)對(duì)照組未觀察到綠色熒光。 結(jié)論:脂質(zhì)體介導(dǎo)法轉(zhuǎn)染的pEGFP-N2標(biāo)記BMSC,可用于裸鼠體內(nèi)示蹤,是一種理想的組織工程化骨組織的示蹤方法。 第6章山羊脛骨大節(jié)段骨缺損模型的制備 目的:為骨組織工程的研究提供理想的動(dòng)物模型。 方法:取9只青山羊隨機(jī)分3組,制備單側(cè)脛骨25mm的骨膜與骨缺損,

12、重建鋼板內(nèi)固定,術(shù)后放射學(xué)檢查、組織學(xué)方法評(píng)價(jià)骨缺損自行修復(fù)情況。 結(jié)果:術(shù)后所有動(dòng)物骨缺損處x線片Lane評(píng)分均為0分,組織學(xué)顯示無(wú)骨組織長(zhǎng)人。 結(jié)論:山羊脛骨適于制備骨缺損和重建鋼板內(nèi)固定模型,其25mm大段骨缺損模型是研究組織工程骨較為理想的動(dòng)物模型。 第7章近同構(gòu)模型修復(fù)山羊脛骨大段骨缺損的初步研究 目的:探索骨組織工程近同構(gòu)模型修復(fù)羊脛骨干骨缺損的可行性。 方法:體外擴(kuò)增自體骨髓基質(zhì)干細(xì)

13、胞,與珊瑚支架材料復(fù)合,植入山羊脛骨缺損處,同時(shí)通過(guò)便攜式微量泵聯(lián)合皮下植入式給藥裝置,建立近同構(gòu)模型-可調(diào)控的體內(nèi)灌注誘導(dǎo)成骨微環(huán)境系統(tǒng),定時(shí)注入DMEM培養(yǎng)液、細(xì)胞因子rhbFGF和rhBMP-2。 結(jié)果:術(shù)后8W觀察結(jié)果:術(shù)后8W組織切片HE染色觀察到近同構(gòu)模型組骨組織形成;對(duì)照組僅見(jiàn)纖維組織長(zhǎng)入。x線觀察,術(shù)后8W近同構(gòu)模型組織工程骨周圍形成骨痂,并與脛骨缺損端融合;對(duì)照組術(shù)后8W時(shí)支架材料部分降解、吸收。 結(jié)論

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