姜黃揮發(fā)油對肺癌細胞及血管生成抑制作用的研究.pdf

1、肺癌是最常見的惡性腫瘤之一，嚴重威脅著人類的生命健康[1]。而目前各種治療肺癌的方法效果都不能令人滿意。因此，尋找安全、有效的藥物是肺癌治療中的重要課題。 隨著近年來全球范圍內新合成化學物質的增多，環(huán)境致癌物對人類健康造成的威脅日趨嚴重，從天然植物中尋找抗癌有效成份已成為國內外學者研究的熱點問題，充分利用藥用植物資源開發(fā)新的抗腫瘤藥物，成為肺癌研究領域的重要內容。 中藥姜黃為姜黃屬植物姜黃的干燥根莖，是常用的一種活血化淤

2、中藥，具有破血行氣、通經止痛、祛風療痹等功效，其主要有效成分為姜黃揮發(fā)油和姜黃素。中藥姜黃資源豐富、價格低廉。其揮發(fā)油含量高、提取方便、無副作用。研究證實姜黃揮發(fā)油具有抗菌、抗炎、去痰、止咳、平喘等作用。 近年來，姜黃揮發(fā)油抗腫瘤作用引起人們極大的關注。最近研究表明姜黃揮發(fā)油能抑制人急性早幼粒白血病細胞株HL-60和肝胚細胞癌HepG2細胞株的增殖，并能促進BALB/C小鼠脾細胞的增殖[5]。目前尚未見有關姜黃揮發(fā)油對肺癌方面作

3、用的文獻報道。 Folkman認為，有兩種細胞群共同影響著腫瘤的生長，一種是高突變率的腫瘤細胞群，另一種是低突變率的內皮細胞群，兩種細胞群通過旁分泌相互刺激生長。因此在治療中同時以兩種細胞群為靶點，比單獨針對腫瘤細胞群的細胞毒治療，可能會更有效[6]。 本課題從研究姜黃揮發(fā)油對人肺腺癌A549細胞及血管生成的作用入手，觀察姜黃揮發(fā)油對肺癌細胞及血管生成的作用，并探討其可能的機制，為深入研究姜黃揮發(fā)油的抗腫瘤作用提供實驗依

4、據。 本課題主要包括以下內容：(一)姜黃揮發(fā)油對人肺癌細胞體外作用的實驗研究1.采用MTT法測定姜黃揮發(fā)油對人肺腺癌A549細胞增殖的影響。 2.采用姬姆薩(Giemsa)染色、丫啶橙熒光染色法、流式細胞儀、透射電鏡觀察姜黃揮發(fā)油對人肺腺癌A549細胞的作用。 (二)姜黃揮發(fā)油抑制血管生成的實驗研究。1.采用MTT法測定姜黃揮發(fā)油對人肺微血管內皮細胞增殖的影響。 2.采用Giemsa染色、丫啶橙熒光染色法

5、測定姜黃揮發(fā)油對人肺微血管內皮細胞的影響。 3.觀察姜黃揮發(fā)油對由人肺腺癌A549細胞誘導的原代培養(yǎng)人臍靜脈內皮細胞小管形成的作用。 4.觀察姜黃揮發(fā)油對雞胚絨毛尿囊膜血管生成的影響。 5.用免疫細胞化學的方法檢測姜黃揮發(fā)油對血管內皮細胞生長因子(VEGF)與堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)蛋白表達的變化。探討姜黃揮發(fā)油對腫瘤血管生成的作用機制。 主要結果1.姜黃揮發(fā)油對人肺腺癌A549細胞及人肺微血管

6、內皮細胞的增殖均有抑制作用，具有明顯的量效和時效性。姜黃揮發(fā)油抑制人肺腺癌A549細胞增殖和誘導凋亡的濃度明顯高于抑制人肺微血管內皮細胞增殖和誘導凋亡的濃度，其對人肺腺癌A549細胞作用的半數抑制濃度(IC50)為1.7μl/ml，對人肺微血管內皮細胞作用的半數抑制濃度(IC50)為0.65μl/ml，表明姜黃揮發(fā)油對血管內皮細胞的增殖抑制作用更為明顯。 2.姜黃揮發(fā)油作用于人肺腺癌A549細胞及人肺微血管內皮細胞后均可出現典型

7、的凋亡細胞形態(tài)學特征，可見胞體縮小、變圓，細胞核固縮，凋亡小體形成等。 3.流式細胞儀檢測：姜黃揮發(fā)油作用于人肺腺癌A549細胞48h，可引起細胞凋亡，凋亡比例隨濃度的增加而增加。其將人肺腺癌A549細胞阻滯于S期。 4.在人臍靜脈血管內皮細胞小管形成實驗中：姜黃揮發(fā)油濃度≥0.6μl/ml，作用時間≥6天時，血管內皮細胞小管形成數較陰性對照組減少非常顯著(p＜0.01)。 5.在雞胚絨毛尿囊膜血管生成實驗中：姜

8、黃揮發(fā)油作用濃度≥0.2μl/ml，實驗組的微血管樣結構數目明顯減少，與對照組相比差異有顯著性(p＜0.01)。 6.采用免疫細胞化學和圖象分析技術發(fā)現：姜黃揮發(fā)油對人肺腺癌A549細胞VEGFbFGF蛋白表達具有明顯抑制作用(p＜0.05)。 結論1.姜黃揮發(fā)油對人肺腺癌A549細胞增殖有抑制作用，這種作用具有明顯的時間和濃度依賴性。臨床可能對肺癌有治療作用。 2.姜黃揮發(fā)油可誘導人肺腺癌A549細胞凋亡，將細

9、胞阻滯于S期，抑制DNA復制。提示其抗腫瘤機制與誘導凋亡有關。 3.姜黃揮發(fā)油抑制人肺腺癌A549細胞增殖和誘導凋亡的濃度明顯高于對人肺微血管內皮細胞的抑制濃度。表明姜黃揮發(fā)油對腫瘤細胞群和內皮細胞群均具有抑制作用，為具有雙重作用的抗腫瘤藥。 4.姜黃揮發(fā)油能夠明顯抑制雞胚絨毛尿囊膜的血管生成及人肺腺癌A549細胞誘導的人臍靜脈血管內皮細胞小管形成，其機理可能與抑制血管生成促進因子(VEGFbFGF)的表達、抑制血管內皮