姜黃素對腫瘤細(xì)胞異常甲基化抑制作用研究.pdf

1、目的：姜黃素(curcumin)是從我國傳統(tǒng)中藥姜黃根莖中提取的一種植物多酚?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，姜黃素具有抗氧化、抗突變、抗腫瘤等多方面的藥理作用，體外實(shí)驗(yàn)及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)，姜黃素可以在多個(gè)靶點(diǎn)抑制腫瘤細(xì)胞的生長和繁殖，抑制大鼠皮膚癌、胃癌、十二指腸癌、結(jié)腸癌及乳腺癌等的發(fā)生。目前研究認(rèn)為其抗腫瘤可能涉及誘發(fā)腫瘤細(xì)胞凋亡、阻斷腫瘤細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)通路、抗氧化和抑制腫瘤血管生成等方面。但由于腫瘤的發(fā)生是一個(gè)多因素、多基因相關(guān)的復(fù)雜過程，姜黃素

2、的抗腫瘤機(jī)制研究有待進(jìn)一步深入。
　　 近年來，表遺傳(epigenetic)機(jī)制在腫瘤發(fā)生中的作用正引起高度關(guān)注，它是發(fā)生在基因表達(dá)水平的可遺傳的、無DNA序列的變化。DNA甲基化就是一種與腫瘤形成密切相關(guān)的表遺傳機(jī)制，研究顯示，DNA甲基化異常可引起基因表達(dá)水平的明顯改變，是細(xì)胞癌變過程中的一個(gè)早期事件。同時(shí)，DNA甲基化也是一個(gè)可逆的過程，因此此過程有可能成為很好的藥物干預(yù)靶點(diǎn)。有報(bào)道初步顯示姜黃素可能是潛在的甲基化抑制劑

3、，本文從DNA甲基化角度探討姜黃素抗腫瘤的表遺傳機(jī)制，研究了不同濃度的姜黃素對體外培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞的生長抑制作用及對p16基因和MGMT基因甲基化狀態(tài)的影響，為姜黃素等中藥成分的抗腫瘤機(jī)理研究提供一個(gè)新的途徑，同時(shí)為姜黃素的臨床應(yīng)用提供科學(xué)的理論依據(jù)。
　　 方法：
　　 1.將人胃癌細(xì)胞株SGC-7901，人宮頸癌細(xì)胞株HeLa，人肝癌細(xì)胞株HepG2在體外培養(yǎng)至對數(shù)生長期，加入不同濃度的姜黃素(20、40、60μmol

4、/L)分別處理三種腫瘤細(xì)胞48小時(shí)。在倒置顯微鏡觀察不同濃度姜黃素處理的SGC-7901細(xì)胞、HeLa細(xì)胞、HepG2細(xì)胞后發(fā)生的形態(tài)學(xué)改變；運(yùn)用基于酶標(biāo)儀的MTT方法檢測腫瘤細(xì)胞的增殖情況。
　　 2.利用甲基化特異性PCR(Methylation-specific PCR，MSP)方法檢測不同劑量的姜黃素作用前后三種腫瘤細(xì)胞中p16基因和MGMT基因甲基化狀態(tài)的改變。
　　 3.RT-PCR法檢測三種腫瘤細(xì)胞經(jīng)姜黃素

5、處理前后其p16基因和MGMT基因表達(dá)水平。
　　 結(jié)果：
　　 1.姜黃素能夠抑制SGC-7901細(xì)胞、HeLa細(xì)胞、HepG2細(xì)胞的生長與增殖，并誘導(dǎo)三種腫瘤細(xì)胞發(fā)生凋亡。
　　 2.SGC-7901細(xì)胞、HeLa細(xì)胞、HepG2細(xì)胞p16基因和MGMT基因的啟動(dòng)子區(qū)CpG島呈異常甲基化狀態(tài)。用姜黃素處理后，低濃度(20μmol/L)的姜黃素對三種腫瘤細(xì)胞p16基因和MGMT基因無明顯的去甲基化作用，中濃度4

6、0μ mol/L與高濃度(60μ mol/L)姜黃素處理后的SGC-7901細(xì)胞、HeLa細(xì)胞、HepG2細(xì)胞，p16基因和MGMT基因的啟動(dòng)子區(qū)CpG島甲基化程度下降。
　　 3.經(jīng)姜黃素處理后，HeLa細(xì)胞p16基因和SGC-7901細(xì)胞的MGMT基因重新表達(dá)或表達(dá)增強(qiáng)，且呈一定的劑量依賴性。
　　 結(jié)論：姜黃素對SGC-7901細(xì)胞、HeLa細(xì)胞、HepG2細(xì)胞的增殖具有明顯抑制作用，且表現(xiàn)出劑量依賴性(P＜0.0