鯉皰疹病毒ⅡORF90和ORF99基因的原核表達(dá)及多克隆抗體的制備.pdf_第1頁(yè)
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1、根據(jù)本實(shí)驗(yàn)室獲得的鯉皰疹病毒Ⅱ(CyHV-2)基因組序列，設(shè)計(jì)特異性引物，通過(guò)PCR擴(kuò)增ORF90、ORF99基因片段，分別克隆至pGEX-KG和pProHTb原核表達(dá)載體，成功構(gòu)建了pGEX-KG-ORF90和pProHTb-ORF99重組子。轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21宿主菌，經(jīng)IPTG誘導(dǎo)，分別獲得了分子量約為56kD和47KD的重組蛋白。SDS-PAGE分析表明 ORF90重組蛋白少量為可溶性蛋白，多以包涵體的形式存在。ORF99重組蛋

2、白則以包涵體存在。純化的重組蛋白均具有較好的ELISA反應(yīng)性。進(jìn)一步將ORF90和 ORF99重組蛋白經(jīng)包涵體純化后免疫新西蘭大白兔制備了 ORF90和ORF99重組蛋白的多克隆抗體。通過(guò)western-blot檢測(cè)其抗體效價(jià)，結(jié)果表明兩個(gè)多抗在1：100000的稀釋倍數(shù)下仍可產(chǎn)生免疫印跡。以免疫組化對(duì)制備的多克隆抗體進(jìn)行檢測(cè)，anti-ORF90抗體在中腎組織的腎小管上皮細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)陽(yáng)性信號(hào)，anti-ORF99抗體在中腎組織的腎小管

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