人類8型皰疹病毒ORF45表達(dá)調(diào)節(jié)的研究.pdf

1、人類8型皰疹病毒(Human herpesvirus 8,HHV-8)可導(dǎo)致卡波西肉瘤等多種腫瘤。HHV-8的復(fù)制與轉(zhuǎn)錄激活蛋白(Replication and transcription activator,RTA)為病毒重激活所必需,并足以完成HHV-8從潛伏態(tài)到裂解態(tài)的轉(zhuǎn)換。RTA能與靶基因啟動(dòng)子上的RRE序列直接結(jié)合,激活靶基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá),也能通過(guò)與細(xì)胞內(nèi)蛋白的相互作用間接與靶序列結(jié)合,激活下游基因的表達(dá)。ORF45是γ型皰疹病

2、毒特有的蛋白,它能與干擾素調(diào)節(jié)因子7(Interferon regulator factor 7,IRF7)相互作用,并抑制IRF7的磷酸化和入核,抑制了I型干擾素的表達(dá),使得病毒逃避宿主的免疫應(yīng)答。ORF45在病毒建立潛伏態(tài)以及進(jìn)入裂解復(fù)制的過(guò)程中也發(fā)揮了重要作用。但目前尚無(wú)關(guān)于RTA是否能激活ORF415表達(dá)的報(bào)道。 本文表達(dá)和純化了ORF45蛋白,并制備了ORF45多克隆抗體。蛋白免疫印跡顯示ORF45多克隆抗體具有較高的

3、滴度和良好的特異性。本文構(gòu)建了全長(zhǎng)及系列缺失的ORF45啟動(dòng)子控制下的報(bào)告質(zhì)粒,并將這些報(bào)告質(zhì)粒與RTA的真核表達(dá)質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)1)RTA能激活ORF45啟動(dòng)子；2)ORF45啟動(dòng)子中應(yīng)答RTA的區(qū)域位于-750 bp～-251 bp;3)RTA的酸性激活結(jié)構(gòu)域是激活ORF45啟動(dòng)子所必需的。我們還將ORF45以及RTA的真核表達(dá)質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞,借助蛋白質(zhì)免疫印跡實(shí)驗(yàn)技術(shù),發(fā)現(xiàn)RTA能減少ORF45的蛋白產(chǎn)量。本文