鴨肝炎病毒單克隆抗體的制備及初步應(yīng)用.pdf

1、山東農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文鴨肝炎病毒單克隆抗體的制備及初步應(yīng)用姓名：楊萍萍申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：預(yù)防獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：崔言順20040612山東農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文鴨肝炎病毒單克隆抗體的制備及初步應(yīng)用摘要鴨病毒性肝炎是由鴨肝炎病毒(DHV)引起的一種主要發(fā)生于3周齡以下雛鴨的傳播迅速、高度致死性的傳染病。本課題對鴨肝炎病毒在雞鴨胚、雞胚成纖維細(xì)胞和雞胚肝細(xì)胞上的生長繁殖進行了研究，制備了純度較高的DHV抗原，以此免疫BALB／c小鼠并建立

2、了間接ELISA篩選方法。經(jīng)過一系列的融合篩選，成功研制了抗I型DHVYZ株單克隆抗體4株，并在檢測DHV抗原、抗體方面進行了初步應(yīng)用。本試驗中對3株I型DIP／在三種不同宿主系統(tǒng)中的增殖進行了比較。用雞胚和鴨胚進行3株DHv的增殖時，均可導(dǎo)致胚體出血、水腫、肝臟出血、邊緣壞死以及花斑肝等典型鴨肝炎癥狀。接種后死亡時間以DHV—YZ株最快，DHvZJS株最慢，ELD“O2m1分別為10“、10‘5、103?！薄２捎秒u胚成纖維細(xì)胞(CEF

3、)和雞胚肝細(xì)胞(CELc)對三株I型DHV進行細(xì)胞培養(yǎng)，結(jié)果表明三株DHV均能適應(yīng)CELC培養(yǎng)，而DHVYZ株不能適應(yīng)CEF培養(yǎng)。經(jīng)數(shù)代盲傳后，在CEF上兩株DHV表現(xiàn)基本相同，在48h時CPE開始出現(xiàn)；面在CELc上表現(xiàn)更為敏感，三株DHV在24h內(nèi)即出現(xiàn)病交。兩種細(xì)胞病變相似，均表現(xiàn)為細(xì)胞圓縮，間隙拉寬，死亡脫落等，測得DHV—ZJS和DHv州J在CEF上的TCID。分別為10“1和103”，細(xì)胞適應(yīng)能力DIN—ZJSDHVNJDH

4、VYZ。各個宿主增殖病毒回歸1日齡雛鴨均導(dǎo)致典型鴨肝炎癥狀。對雞胚和鴨胚增殖的尿囊液病毒用反復(fù)凍融、氯仿處理、022岫濾膜過濾、PEG反透析濃縮以及SephadexG200分子篩層析的方法進行純化，并以此來包被酶標(biāo)板以及進行BALB／c小鼠免疫，效果良好。經(jīng)反復(fù)試驗，本研究確定了間接ELISA篩選陽性雜交瘤細(xì)胞株的最佳反應(yīng)條件，即：抗原包被濃度為05心／孔，以1：6400稀釋的陰、陽性血清分別作為陰、陽性對照，反應(yīng)條件均以37℃60ra