訶子湯制草烏對心肌細胞毒性損傷及減毒機制研究.pdf

1、本課題以毛茛科植物北烏頭的干燥塊根（蒙藥“泵嘎”）為研究對象。用蒙醫(yī)傳統(tǒng)炮制方法訶子湯炮制草烏，乙醚分別提取生草烏和訶子湯制草烏中的總生物堿。以原代培養(yǎng)的乳大鼠心肌細胞為對象研究生草烏、訶子湯制草烏總生物堿對心肌細胞的毒性;以細胞存活率（MTT法）、細胞乳酸脫氫酶(LDH)漏出率等指標反映細胞毒性變化;采用Hoechst33528熒光染色法和AnnexinV/PI雙染色法研究心肌細胞凋亡;并用流式細胞儀檢測心肌細胞[Ca2+]i變化，研

2、究訶子湯制草烏對心肌細胞毒性損傷及減毒機制研究。
　　 心肌細胞毒性機制的研究:制備乳大鼠原代心肌細胞，細胞平均存活率≥91％，經(jīng)免疫組織化學染色鑒定，小鼠抗大鼠α-橫紋肌肌動蛋白為陽性而兔抗大鼠纖連蛋白多克隆抗體為陰性。將訶子湯制草烏總生物堿和生草烏總生物堿給予心肌細胞，共同孵育30min、60min，結果發(fā)現(xiàn)兩者均能降低心肌細胞活力，細胞LDH漏出率增加，發(fā)生細胞凋亡，產(chǎn)生細胞毒性;生草烏總生物堿對心肌細胞存活抑制率和乳酸脫

3、氫酶(LDH)漏出率均強于訶子湯制草烏總生物堿(P＜0.01);且生草烏總生物堿致使心肌細胞的凋亡率高于訶子湯制草烏總生物堿(P＜0.05);給藥組的早期凋亡率小于晚期凋亡率;在給藥30min時，用熒光探針Fluo4-AM檢測心肌細胞[Ca2+]i變化，發(fā)現(xiàn)訶子湯制草烏和生草烏總生物堿均可提高心肌細胞[Ca2+]i，但訶子湯制草烏總生物堿提高細胞[Ca2+]i均低于生草烏總生物堿相同劑量組。認為生草烏總生物堿改變心肌細胞[Ca2+]i是

4、導致心肌細胞凋亡的最終可能機制。
　　 減毒機制通過研究:不同濃度的生草烏總生物堿和訶子湯制草烏總生物堿對心肌細胞的影響程度不同，通過細胞活力、細胞膜通透性變化、細胞凋亡程度和細胞[Ca2+]i的變化來評價兩者對心肌細胞的毒性;研究結果發(fā)現(xiàn)訶子湯制草烏總生物堿通過減輕心肌細胞膜通透性及低細胞凋亡率，從而降低心肌細胞毒性。訶子湯炮制草烏對心肌細胞[Ca2+]i影響弱于生草烏，認為這是訶子湯制草烏降低心肌毒性的可能機制。通過以上對生