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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:
觀察黃酒是否有類他汀樣作用,是否對(duì)TNF-α誘導(dǎo)的大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷有抑制作用并探討其可能的機(jī)制。
方法:
大鼠原代主動(dòng)脈血管內(nèi)皮細(xì)胞經(jīng)分離培養(yǎng)及純化鑒定后,取第3~4代細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。每種酒(酒精度分別為1.0%、1.2%、1.4%、1.6%、1.8%、2.0%)與50ug/LTNF-α共同孵育VECs48h,MTT法檢測(cè)不同酒精度的各個(gè)酒類對(duì)細(xì)胞活性的影響,確定酒的最佳干預(yù)濃度后,分為contr
2、ol組、TNF-α組、TNF-α+瑞舒伐他汀組(10umol/L)、TNF-α+酒精組(0.5%、1.0%、1.5%)、TNF-α+黃酒組(0.5%、1.0%、1.5%)9組。培養(yǎng)24h后收集樣品,硝酸還原酶法測(cè)定培養(yǎng)液上清液NO的含量,化學(xué)比色法測(cè)定細(xì)胞中eNOS的活性。培養(yǎng)48h后收集蛋白,用于免疫印跡法檢測(cè)VECs中eNOS、iNOS和ICAM-1蛋白的表達(dá)量。
結(jié)果:
1.與對(duì)照組相比,以50μg/L TNF
3、-α刺激VECs,其培養(yǎng)上清液中的NO含量明顯降低(P<0.05);與TNF-α組相比,瑞舒伐他汀組、黃酒1.0%組和黃酒1.5%組均可增加NO的含量(P<0.01或P<0.05);NO含量在酒精0.5%、1.0%、1.5%組和黃酒0.5%組與TNF-α組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
2.與對(duì)照組相比,TNF-α組eNOS活性降低(P<0.05);與TNF-α組相比,eNOS的活性在瑞舒伐他汀組、黃酒1.0%組和黃酒
4、1.5%組顯著升高(P<0.01或P<0.05),在酒精0.5%、1.0%、1.5%組和黃酒0.5%組差異不顯著(P>0.05)。
3.免疫印跡法檢測(cè)各組eNOS、iNOS和ICAM-1蛋白在VECs中的表達(dá)量
(1)各組eNOS蛋白表達(dá)量:TNF-α組較對(duì)照組eNOS蛋白的表達(dá)水平減少(P<0.01);與TNF-α組比較,瑞舒伐他汀組、黃酒1.0%組、黃酒1.5%組,均可促進(jìn)eNOS蛋白的表達(dá)(P<0.01或P<0
5、.05),而酒精0.5%組、酒精1.0%組、酒精1.5%組與TNF-α組相比,eNOS蛋白表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;與瑞舒伐他汀組相比,黃酒1.0%組和黃酒1.5%組與其有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
(2)各組iNOS蛋白表達(dá)量:與TNF-α組相比,瑞舒伐他汀組、黃酒1.0%組、黃酒1.5%組iNOS蛋白表達(dá)降低(P<0.01或P<0.05),酒精0.5%組、酒精1.0%組、酒精1.5%組與TNF-α組相比,iNOS蛋白表達(dá)差異
6、無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;相比瑞舒伐他汀組,黃酒1.0%組和黃酒1.5%組iNOS蛋白的表達(dá)與其差異顯著(P<0.05)。
(3)各組ICAM-1蛋白表達(dá)量:與TNF-α組比較,瑞舒伐他汀組、黃酒1.0%組、黃酒1.5%組ICAM-1蛋白表達(dá)降低(P<0.01或P<0.05),酒精0.5%組、酒精1.0%組、酒精1.5%組中ICAM-1蛋白表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;相比瑞舒伐他汀組,黃酒1.0%組和黃酒1.5%組ICAM-1蛋白的表達(dá)與其同樣
7、差異顯著(P<0.05)。
結(jié)論:
1.TNF-α能降低大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞上清中NO的水平,抑制eNOS活性及其蛋白的表達(dá),促進(jìn)iNOS、ICAM-1蛋白的表達(dá),引起血管內(nèi)皮功能不全,從而促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展。
2.黃酒和瑞舒伐他汀均能夠增加血管內(nèi)皮細(xì)胞上清中NO的水平,增強(qiáng)eNOS活性,促進(jìn)eNOS蛋白表達(dá),抑制iNOS、ICAM-1蛋白的表達(dá)。
3.黃酒具有類似瑞舒伐他汀的作用。
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