組織微陣列技術在SV40與人膠質瘤發(fā)生發(fā)展相關性研究中的應用.pdf

1、本文分四部分論述了組織微陣列技術在SV40與人膠質瘤發(fā)生發(fā)展相關性研究中的應用。 第一部分人膠質瘤組織芯片的構建。 目的：建立人腦膠質瘤組織微陣列(組織芯片)，為進行膠質瘤相關的基礎研究提供實驗工具。 方法：根據(jù)文獻采用半手工工藝，適當進行改良，利用國內生產的組織芯片點樣儀同時構建二個U8位組織芯片。 結果：根據(jù)標本情況精心設計微陣列，經(jīng)過預制受體蠟塊、供體蠟塊的定位、取樣、連續(xù)切片、托片與烤片等過程，在

2、二塊36mm×26mm的蠟塊制作成相同的n8位點、孔徑L5mm的組織芯片蠟塊，并切成4μm的微陣列。肉眼觀察，點陣分布均勻一致，蠟塊無裂紋，載玻片上點陣無脫落，但其中有4個點陣發(fā)生移位，移位率0．03％。HE切片顯示取樣組織邊緣銳利，無明顯組織擠壓和結構變形，所取組織點陣符合研究要求。 結論： 1．本研究構建的二個包含有人膠質瘤、其它顱內常見腫瘤、膠質瘤動物移植瘤、基因工程鼠腦腫瘤、正常腦組織和人體其它正常組織在內的組織

3、芯片，為膠質瘤相關的基因和蛋白質功能的研究進而揭示膠質瘤的分子病因提供了高效、便捷的研究工具。 2．構建高質量的組織芯片，有賴于建立標準化的標本蠟塊庫。 3．供體蠟塊準確的病理學診斷與定位關系到組織芯片檢測結果的可靠性。 第二部分SV40Tag在人腦膠質瘤中的表達及其意義。 目的：通過對SV40Tag在腦膠質瘤組織芯片中的表達情況的檢測分析SV40感染與膠質瘤發(fā)生發(fā)展的相關的可能性。 方法：利用第

4、一部分制作的膠質瘤組織芯片，采用免疫組織化學的方法檢測SV40Tag在膠質瘤等各類組織中的表達情況，比較人膠質瘤與顱內非膠質瘤、腦腫瘤與正常腦組織、不同級別的膠質瘤、不同類型的膠質瘤之間SV40Tag表達的差異。借助CMIAS多功能真彩色圖象分析系統(tǒng)判定免疫組化陽性結果。用SPSSl0．O統(tǒng)計學軟件包對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學處理。 結果：①本組92例腦腫瘤中，膠質瘤陽性表達SV40Tag65．8％；經(jīng)統(tǒng)計學分析，膠質瘤與非膠質瘤之間比較

5、，SV40Tag的陽性表達無顯著差異。②隨著膠質瘤級別的上升陽性表達率增加，經(jīng)統(tǒng)計學處理，提示SV40Tag的表達與膠質瘤的惡性程度呈顯著正相關。③不同類型膠質瘤陽性表達SV40Tag無顯著統(tǒng)計學差異。④正常腦組織中未見到SV40Tag的表達，與腦腫瘤組有顯著統(tǒng)計學差異。 結論：SV40Tag在正常組織中不表達，大部分腦腫瘤組織中表達，表明SV40病毒基因感染與腫瘤發(fā)生相關。就膠質瘤而言，隨其惡性程度增加而表達量增加，表明其不但

6、是膠質瘤發(fā)生還是膠質瘤發(fā)展的分子病因。 第三部分抑癌基因助和病毒源性癌基因SV40Tag在人腦膠質瘤組織芯片中的表達的初步研究。 目的：通過對Pb基因和SV40Tag基因在相同的組織芯片中檢測，分析兩者在膠質瘤發(fā)生發(fā)展中的相互關系。 方法：利用第一部分制作的組織芯片，采用免疫組織化學的方法檢測Pb抑癌蛋白在膠質瘤中的表達情況，比較人膠質瘤與顱內非膠質瘤、腦腫瘤與正常腦組織、不同級別的膠質瘤之間Pb抑癌蛋白表達的差

7、異，對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學處理，明確差異的顯著性：采用免疫組織化學和免疫熒光雙重標記(FITC-CY3)的方法觀察SV40Tag與PB表達的相關性。結果：①本組膠質瘤82例，Pb陽性表達率為64．6％(53／82)；腦良性腫瘤總的Pb陽性表達率達87．5％，正常對照的腦組織陽性表達Pb蛋白77．8％(7／9)，Pb蛋白的陽性表達在膠質瘤與非膠質瘤之間有顯著差異，腦腫瘤與正常腦組織間無顯著差異。②隨著膠質瘤級別的上升Pb陽性表達率下降，膠質瘤工

8、、II、III、工V級間陽性細胞百分率比較有顯著的統(tǒng)計學意義(P

9、異常膠質瘤惡性程度增加而降低，這一結果表明：兩者在膠質瘤發(fā)生發(fā)展中，前者起的是癌基因的激活、后者起的是抑癌基因失活的作用；兩者在一部分病例中的共表達，還間接表明SV40Tag與Pb蛋白特異性的結合可使Rb失去活性。 第四部分信號傳導基因IRS一1和病毒源性癌基因SV40Tag在膠質瘤組織芯片中表達的初步研究。 目的：通過對信號傳導通路IRS—l蛋白和病毒源性癌基因SV40Tag在相同的組織芯片中檢測，分析兩者在腦膠質瘤發(fā)

10、生發(fā)展中的作用。 方法：利用自制的膠質瘤組織芯片，采用免疫組織化學的方法檢測IRS-1在膠質瘤中的表達情況，比較人膠質瘤與顱內非膠質瘤、腦腫瘤與正常腦組織、不同級別的膠質瘤之間IRS一1表達的差異，對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學處理，明確差異的顯著性；采用免疫組織化學和免疫熒光雙重標記(FITC-CY3)的方法觀察SV40Tag與IRS-1表達情況。 結果：①本組膠質瘤82例，IRS一1陽性表達率為48．5％(40／82)：腦良性腫瘤

11、僅1例表達，正常對照的腦組織陽性表達率22．2％(2／9)，IRS一1的陽性表達在膠質瘤與非膠質瘤之間有顯著差異(P<0．05)。②隨著膠質瘤級別的上升IRS一1陽性表達率上升，膠質瘤I、II、III、IV級間陽性細胞百分率比較有顯著的統(tǒng)計學意義(P