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文檔簡介
1、【目的】:
建立耐熱肝癌細(xì)胞株(HepG-2/thermotolerance,HepG-2/tt)后,探討其細(xì)胞內(nèi)內(nèi)源性硫化氫的生成和含量及合酶活性是否增加,以及內(nèi)源性硫化氫生成酶的表達(dá)是否受到上調(diào)。
【方法】:
以普通肝癌細(xì)胞 HepG-2為細(xì)胞模型,在43℃水浴環(huán)境下培養(yǎng)4小時后建立了耐熱肝癌細(xì)胞株(HepG-2/tt)。設(shè) HepG-2細(xì)胞和HepG-2/tt細(xì)胞兩組,然后將 HepG-2細(xì)胞和Hep
2、G-2/tt細(xì)胞同時放入43℃水溶環(huán)境下培養(yǎng)4小時后通過臺盼藍(lán)染色(Trypan blue dye exclusion)檢測 HepG-2和HepG-2/tt的細(xì)胞活力; Hoechst33258染色、PI流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡率;亞甲基藍(lán)顯色分光光度計(jì)法檢測HepG-2細(xì)胞和HepG-2/tt細(xì)胞上清液中H2S含量和H2S合酶活性;Western Blot檢測HepG-2和HepG-2/tt細(xì)胞中CBS、CSE和MPST的表達(dá)。
3、> 【結(jié)果】:
HepG-2和HepG-2/tt的細(xì)胞活力:HepG-2細(xì)胞的存活率是26.3%±0.8%, HepG-2/tt的存活率為72.6%±0.3%,兩組間具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。
HepG-2和HepG-2/tt細(xì)胞凋亡率:HepG-2細(xì)胞凋亡率42.3%±2.6%,HepG-2/tt細(xì)胞凋亡率27.2%±0.5%,兩組間具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。
HepG-2細(xì)胞和HepG-2
4、/tt細(xì)胞兩組細(xì)胞上清液中H2S的含量:HepG-2上清液中的硫化氫含量是0.08±0.016(nmol/mg.protein),HepG-2/tt上清液中的硫化氫含量是0.143±0.009(nmol/mg.protein)。兩組間具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。
HepG-2細(xì)胞和HepG-2/tt細(xì)胞兩組細(xì)胞中H2S合酶活性:HepG-2細(xì)胞中H2S合酶活性為0.309±0.017(nmol/min/mg.protein
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