內(nèi)源性硫化氫涉及肝癌細(xì)胞HepG-2熱耐受性的形成.pdf

1、【目的】：
　　建立耐熱肝癌細(xì)胞株（HepG-2/thermotolerance,HepG-2/tt）后，探討其細(xì)胞內(nèi)內(nèi)源性硫化氫的生成和含量及合酶活性是否增加，以及內(nèi)源性硫化氫生成酶的表達(dá)是否受到上調(diào)。
　　【方法】：
　　以普通肝癌細(xì)胞 HepG-2為細(xì)胞模型，在43℃水浴環(huán)境下培養(yǎng)4小時后建立了耐熱肝癌細(xì)胞株（HepG-2/tt）。設(shè) HepG-2細(xì)胞和HepG-2/tt細(xì)胞兩組，然后將 HepG-2細(xì)胞和Hep

2、G-2/tt細(xì)胞同時放入43℃水溶環(huán)境下培養(yǎng)4小時后通過臺盼藍(lán)染色（Trypan blue dye exclusion）檢測 HepG-2和HepG-2/tt的細(xì)胞活力； Hoechst33258染色、PI流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡率；亞甲基藍(lán)顯色分光光度計(jì)法檢測HepG-2細(xì)胞和HepG-2/tt細(xì)胞上清液中H2S含量和H2S合酶活性；Western Blot檢測HepG-2和HepG-2/tt細(xì)胞中CBS、CSE和MPST的表達(dá)。

3、>　　【結(jié)果】：
　　HepG-2和HepG-2/tt的細(xì)胞活力：HepG-2細(xì)胞的存活率是26.3％±0.8%， HepG-2/tt的存活率為72.6%±0.3%，兩組間具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。
　　HepG-2和HepG-2/tt細(xì)胞凋亡率：HepG-2細(xì)胞凋亡率42.3%±2.6%，HepG-2/tt細(xì)胞凋亡率27.2%±0.5%，兩組間具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。
　　HepG-2細(xì)胞和HepG-2

4、/tt細(xì)胞兩組細(xì)胞上清液中H2S的含量：HepG-2上清液中的硫化氫含量是0.08±0.016(nmol/mg.protein)，HepG-2/tt上清液中的硫化氫含量是0.143±0.009(nmol/mg.protein)。兩組間具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。
　　HepG-2細(xì)胞和HepG-2/tt細(xì)胞兩組細(xì)胞中H2S合酶活性：HepG-2細(xì)胞中H2S合酶活性為0.309±0.017(nmol/min/mg.protein