DATS通過ROS活化MLK3-JNK誘導HL-60細胞凋亡.pdf

1、目的：探討DATS誘導HL-60細胞凋亡的分子機制，并探討活性氧在JNK活化過程中的作用。
　　方法：用濃度為50、100、150μM的DATS處理HL-60細胞0、0.5、1、3、6、12h，或用抗氧化劑N-乙酰半胱氨酸（N-acetyl-L-cysteine，NAC）預孵育HL-60細胞30min后，再用濃度為100μM的DATS處理HL-60細胞0、0.5、1、3、6、12h，流式細胞術檢測細胞內(nèi)的ROS水平；蛋白印跡法檢測

2、MLK3、JNK的磷酸化水平；Hoechst染色觀察細胞的凋亡形態(tài)變化和DNA Ladder檢測細胞凋亡；用MLK特異性阻滯劑CEP-1347預處理后，觀察100μM DATS處理細胞3h后蛋白p-JNK的表達變化。
　　結果：不同濃度DATS處理HL-60細胞不同時間后，細胞流式檢測顯示ROS的產(chǎn)生與DATS處理呈時間劑量依賴關系，在0.5-3h隨著DATS處理時間和濃度的升高而升高，ROS的熒光強度在3h、150μM時達到最高

3、峰(為89.7±3.67)，其后維持在一個較高水平。
　　DATS處理HL-60細胞3h，開始出現(xiàn)細胞凋亡與DNA斷裂，6-24h時，細胞出現(xiàn)明顯的核固縮，核崩解，明顯的DNA梯度等凋亡表現(xiàn)，用ROS阻斷劑NAC預處理后，Hoechst染色和DNA Ladder分析均未出現(xiàn)凋亡的表現(xiàn)。
　　DATS能誘導HL-60細胞 MLK3磷酸化水平顯著升高，NAC能顯著下調HL-60細胞MLK3的磷酸化水平，MLK特異性阻滯劑CEP-