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1、RNAi抑制Hl-60細(xì)胞FLT3基因表達(dá)及誘導(dǎo)凋亡的研究FLT3基因的突變、過(guò)度表達(dá)與急性髓系白血病(acutemyeloidleukemia,AML)的發(fā)生密切相關(guān)。AML中最常見(jiàn)的突變有FLT3內(nèi)串聯(lián)復(fù)制(internaltandemduplication,FLT3-TTD)和FLT3激酶區(qū)活化環(huán)內(nèi)的點(diǎn)突變(Kinasedomainmutation:KDM)兩種形式。 RNAi是雙鏈RNA介導(dǎo)的遺傳干涉現(xiàn)象，它能夠特異、有
2、效地降解mRNA，從而引起轉(zhuǎn)錄后水平的基因沉默。這為腫瘤的預(yù)防和治療提供了新的方法和思路。 目的：針對(duì)FLT3基因構(gòu)建shRNA-FLT3的表達(dá)載體pGenesil-1-shRNA-FLT3，轉(zhuǎn)染HL-60細(xì)胞，研究RNAi對(duì)HL-60細(xì)胞FLT3基因表達(dá)及誘導(dǎo)凋亡作用的影響，為AML的預(yù)防和治療提供新的思路。 方法：根據(jù)RNAi原理，構(gòu)建siRNA的表達(dá)載體pGenesil-1-shRNA-FLT3，先后用脂質(zhì)體法和電
3、穿孔法轉(zhuǎn)染HL-60細(xì)胞，用RT-PCR檢測(cè)FLT3的mRNA表達(dá)，Westernblot檢測(cè)FLT3蛋白水平，流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況，MTT檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)活力。 結(jié)果：成功構(gòu)建了shRNA-FLT3表達(dá)載體pGenesil-1-shRNA-FLT3。轉(zhuǎn)染HL-60細(xì)胞48d,時(shí)后，RT-PCR、Westernblot檢測(cè)顯示FLT3的mRNA表達(dá)明顯受到抑制(p＜0.05)，F(xiàn)LT3蛋白質(zhì)的表達(dá)下降(p＜0.05)，流式細(xì)胞
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