DATS誘導(dǎo)HL-60細胞ROS產(chǎn)生及其對細胞損傷作用.pdf

1、目的：探討二烯丙基三硫(diallyl trisulfide，DATS)誘導(dǎo)人急性髓性白血病細胞（HL-60細胞）活性氧(reactive oxygen species，ROS)的產(chǎn)生及其對細胞損傷的作用。 方法：以濃度為50、100、150、200μM的DATS處理HL-60細胞0、1、3、6、12、24h；或用NADPH氧化酶特異性阻斷劑加拿大麻素（Apocynin）或抗氧化劑N-乙酰半胱氨酸（N-acetyl-L-cyst

2、eine，NAC）預(yù)孵育HL-60細胞30min后，再用150μM 的DATS處理0、1、3、6、12、24h，收集細胞用于下列分析。細胞流式檢測HL-60細胞內(nèi)的ROS水平，NBT還原實驗分析NADPH 氧化酶活性，丫啶橙（AO）/溴化乙錠（EB）熒光染色觀察細胞凋亡情況，細胞計數(shù)檢測細胞凋亡率，分光光度計檢測細胞質(zhì)膜氧化產(chǎn)物丙二醛（Maleic Dialdehyde，MDA）與細胞蛋白氧化產(chǎn)物羰基化蛋白（Protein Carbon

3、yl）。 結(jié)果：不同濃度DATS處理HL-60細胞不同時間后，細胞流式檢測顯示ROS的產(chǎn)生與DATS處理呈時間劑量依賴關(guān)系，在1、3h 隨著DATS處理時間和濃度的升高而升高，ROS的熒光強度在3h、150μM時達到最高峰，值為63.1±0.120，其后維持在一個較高水平。細胞凋亡率在各濃度3-6h之間有一個明顯的上升趨勢，12h后趨于平穩(wěn)。應(yīng)用Apocynin或是抗氧化劑NAC后，可顯著的降低HL-60細胞ROS的產(chǎn)生和凋亡。

4、HL-60細胞的脂質(zhì)過氧化和羰基化蛋白濃度與DATS誘導(dǎo)ROS產(chǎn)生的趨勢基本一致，都在3h、150μM處理點達到最高值，分別為2.711±0.065 nmol/mg、10.813±0.586 nmol/mg。 結(jié)論： 1. DATS誘導(dǎo)HL-60細胞產(chǎn)生ROS，NADPH氧化酶是DATS誘導(dǎo)HL-60細胞ROS產(chǎn)生的主要酶系。 2. DATS誘導(dǎo)產(chǎn)生的ROS能介導(dǎo)細胞凋亡。 3. DATS誘導(dǎo)產(chǎn)生的ROS