肺微血管內(nèi)皮細胞A2A受體胞內(nèi)信號傳導(dǎo)途徑對炎癥反應(yīng)的機制研究.pdf

1、目的:
　　1.闡明肺微血管內(nèi)皮細胞的A2A受體胞內(nèi)信號傳導(dǎo)途徑。
　　2.探討肺微血管內(nèi)皮細胞A2A受體胞內(nèi)信號傳導(dǎo)途徑激活對炎癥反應(yīng)的影響。
　　方法:
　　本實驗利用培養(yǎng)的PMVECs為研究對象。通過LPS（終濃度10ug/ml）誘導(dǎo)肺微血管內(nèi)皮細胞，對細胞造成損傷，利用激光共聚焦顯微鏡羅丹明123(R-123)熒光染色法檢測各組PMVECs線粒體膜電位(△ψm)，反應(yīng)細胞的早期損傷;采用ELISA法檢測四

2、組的細胞內(nèi)cAMP的含量，進而反應(yīng)cAMP/PKA該信號通路的激活情況;Western-Blot法檢測各組的PI3K/Akt磷酸化水平，反應(yīng)PI3K/Akt該信號通路的激活情況，Western-Blot法檢測各組NF-κ B p65磷酸化水平，反應(yīng)細胞損傷及凋亡的啟動。實驗分四組:1、正常組(Normal)，2、脂多糖誘導(dǎo)組(LPS)，3、LPS+CGS（A2AR選擇性激動劑）組，4、LPS+SCH（A2AR選擇性拮抗劑）組。
　

3、　結(jié)果:
　　1.各組R-123熒光強度:LPS組較Normal組減弱，LPS+CGS組較LPS組顯著增強，LPS+SCH組比LPS組減弱（（P均＜0.05）。表明LPS誘導(dǎo)下情況下，PMVECs線粒體膜電位下降，CGS可以明顯升高LPS誘導(dǎo)線粒體膜電位， SCH可以降低LPS誘導(dǎo)的線粒體膜電位。
　　2.cAMP表達量:LPS組較Normal降低（P均＜0.05）;LPS+CGS組比LPS組升高;LPS+SCH組比LPS組

4、降低（P均＜0.01）。
　　3.Akt磷酸化水平:LPS組較Normal磷酸化水平降低;LPS+CGS組較LPS組磷酸化水平升高;LPS+SCH組較LPS組磷酸化水平降低（P均＜0.05）。
　　4.NF-κBp65磷酸化水平:LPS組較Normal組升高;LPS+CGS組比LPS組降低;LPS+SCH組比LPS組升高（P均＜0.05）。
　　結(jié)論:
　　激動A2AR可促進cAMP的表達，同時促進Akt磷酸化，