網(wǎng)膜素通過Akt-eNOS通路調(diào)控ARDS肺微血管內(nèi)皮細胞屏障的機制研究.pdf

1、背景和目的：肺部炎癥反應(yīng)爆發(fā)和肺微血管內(nèi)皮屏障通透性增高是ARDS的病理生理特點。網(wǎng)膜素是一種目前新近發(fā)現(xiàn)的與炎癥反應(yīng)、脂肪堆積密切相關(guān)的脂肪細胞因子。研究已證實網(wǎng)膜素具有抗炎、抗凋亡、抗氧化、增加胰島素抵抗等多種生物學(xué)效能，在多種肥胖相關(guān)血管疾病中扮演保護性角色。但其與ARDS的關(guān)系尚未見相關(guān)研究報道。本研究擬探討網(wǎng)膜素對ARDS的調(diào)控效應(yīng)及潛在機制，為ARDS的診治提供新思路。
　　方法：檢測ARDS患者及健康受試者外周血血漿

2、網(wǎng)膜素水平，并評估其在ARDS中的臨床意義。體內(nèi)實驗用轉(zhuǎn)染表達人網(wǎng)膜素腺病毒（adenoviral vector expressing omentin，Ad-omentin）的野生型C57BL/6小鼠構(gòu)建ARDS小鼠模型，并檢測炎癥反應(yīng)及血管通透性相關(guān)指標，探討網(wǎng)膜素對ARDS的調(diào)控效應(yīng)。體外實驗用重組人網(wǎng)膜素預(yù)處理人肺微血管內(nèi)皮細胞（human pulmonary microvascular endothelial cells,HPM

3、ECs），檢測炎癥反應(yīng)、內(nèi)皮細胞屏障相關(guān)指標，并進一步探討潛在分子學(xué)機制。
　　結(jié)果：
　　1.臨床研究示，與健康受試者比較，ARDS患者血漿網(wǎng)膜素水平顯著降低。進一步分層分析示，死亡組網(wǎng)膜素水平顯著低于生存組，中重度組網(wǎng)膜素水平顯著低于輕度組。相關(guān)分析示，ARDS患者血漿網(wǎng)膜素水平與白細胞數(shù)及降鈣素水平成負相關(guān)，與患者機械通氣時間、RICU入住時間無顯著相關(guān)性。
　　2.體內(nèi)實驗證實，預(yù)先轉(zhuǎn)染表達人網(wǎng)膜素的腺病毒可顯

4、著抑制ARDS小鼠肺組織炎癥反應(yīng)，減輕肺血管內(nèi)皮細胞損傷，降低肺血管通透性，維持粘附連接蛋白β-catenin和VE-cadherin及細胞肌動蛋白骨架的穩(wěn)定。
　　3.體外實驗證實，重組人網(wǎng)膜素預(yù)處理可減輕LPS誘導(dǎo)的肺血管通透性增高，穩(wěn)定HPVECs粘附連接蛋白β-catenin和VE-cadherin的表達，減輕肌動蛋白骨架重構(gòu)，降低Src激酶磷酸化水平，同時重組人網(wǎng)膜素預(yù)處理亦可降低LPS引起的內(nèi)皮細胞凋亡水平及caspa

5、se3剪切活化水平，且部分緩解內(nèi)皮細胞分化障礙，但對內(nèi)皮細胞遷移無顯著影響。
　　4.體內(nèi)外實驗均證實，網(wǎng)膜素處理可提高Akt、GSK-3β、eNOS磷酸化水平。分別予以LY294002和L-NAME抑制Akt/eNOS信號通路，可顯著消弱網(wǎng)膜素介導(dǎo)的肺血管內(nèi)皮屏障保護效應(yīng)。
　　結(jié)論：我們發(fā)現(xiàn)，網(wǎng)膜素可通過抑制肺組織炎癥反應(yīng)及減輕內(nèi)皮細胞屏障障礙，從而對ARDS發(fā)揮保護性調(diào)控，其機制至少部分通過激活A(yù)kt/eNOS信號通路