丙泊酚預處理對乳鼠腦片谷氨酸損傷保護作用的研究.pdf

1、目的：探索并熟練掌握離體腦片培養(yǎng)技術；建立離體腦片的谷氨酸損傷模型；探討丙泊酚預處理對乳鼠腦片谷氨酸損傷的保護作用。
　　方法：取新生10-15天乳鼠皮層切成400UM厚度的腦片置于有微孔膜的培養(yǎng)皿內同時放入37℃,5％CO2、95%O2的標準培養(yǎng)箱保持腦片在氣液界面上進行培養(yǎng)。腦片培養(yǎng)成功至第七天隨機分為四組：A組（正常對照組），B組（谷氨酸損傷組），C組（10mg/l丙泊酚預處理組），D組（20mg/l丙泊酚預處理組）。C組和

2、D組分別予以10mg/l、20mg/l丙泊酚預處理24h后B、C、D組予以1mmol/L谷氨酸損傷0.5h，所有分組換正常培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)24h后觀察。觀察指標為：腦片形態(tài)學觀察；HE染色后腦片組織內細胞形態(tài)變化和透射電鏡下細胞超微結構變化；TTC（2,3,5—氯化三苯基四氮唑)染色比色法測定各組腦片組織損傷率；乳酸脫氫酶（LDH）檢測漏出率；使用免疫組織化學法檢測星形膠質細胞標記物膠質纖維酸性蛋白（GFAP）表達的變化。
　　結果

3、：1.顯微鏡下培養(yǎng)腦片逐漸變薄、細胞形態(tài)完整、存活良好；HE染色 A組腦片層次清楚，各層神經元數(shù)量多、密度大，胞內核大而圓呈藍色，胞漿染色淺呈淡紅色，部分可見明顯核仁，神經元周圍有許多圓形或橢圓形膠質細胞。B組腦片結構無A組豐富，神經元數(shù)量及密度明顯減少，細胞空泡狀，胞核固縮，部分細胞卷曲、皺縮變形，膠質細胞明顯增多。C和D組細胞數(shù)量減少不明顯，可見少量細胞胞漿呈深紅色，核固縮。2.透射電鏡下A組見神經元細胞核仁明顯，核染色質均勻，核膜

4、呈兩暗一明、均質正常；細胞漿內各種細胞器豐富、正常，見大量散在核糖體，胞漿線粒體、粗面內質網(wǎng)結構完好。B組核染色質邊集、核膜破裂，線粒體腫脹空化、嵴消失，粗面內質網(wǎng)溶解、消失。C和D組胞膜、核膜正常，胞漿內細胞器數(shù)量明顯減少不如正常組豐富，核膜融合、裂隙增寬，細胞漿稀疏出現(xiàn)溶解現(xiàn)象，部分粗面內質網(wǎng)擴張見局灶溶解。3.乳酸脫氫酶（LDH）漏出率及皮層腦片TTC染色組織損傷率結果顯示：C、D組與B組比較，差異有統(tǒng)計學意義；D組較C組培養(yǎng)液中

5、LDH釋放量及LDH釋放率減少，二者間差異有統(tǒng)計學意義，D組較C組皮層腦片TTC染色吸光度值（A490）高,組織損傷率低,二者間差異有統(tǒng)計學意義。4.A組星形膠質細胞均勻分布，細胞核較小、呈圓形或卵圓形，細胞突起細長,GFAP陽性的星形膠質細胞表達少；B組星形膠質細胞胞體肥大、腫脹、突起增多,GFAP陽性的星形膠質細胞表達增加，陽性反應強；C、D組與B組相比GFAP陽性膠質細胞數(shù)量減少,陽性反應減弱,細胞形態(tài)有所恢復。
　　結論：