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1、目的:對(duì)谷氨酸損傷后乳鼠皮層腦片的神經(jīng)細(xì)胞用不同濃度神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)后處理的作用。
方法:采用新生7日齡SD大鼠皮層腦片的谷氨酸損傷模型,又分別分為對(duì)照組、損傷組、10μmol/L GN F,50μmol/L GNF及100μmol/L GNF后處理組,所以共分5組,每組12例。損傷組和后處理組腦片培養(yǎng)第六天用谷氨酸的培養(yǎng)基孵育30min;然后給予含10μmol/L GNF,50μmol/L GNF及100μmol/L
2、GNF1mmol/L的培養(yǎng)基孵育24H;正常組用原培養(yǎng)基培養(yǎng);對(duì)谷氨酸損傷后再培養(yǎng)24h的腦片采用2,3,5-三苯基四氮唑(TTC)染色后測(cè)定其A490nm時(shí)的OD值以計(jì)算組織損傷率;分析腦片活性用乳酸脫氫酶(LDH)釋放率OD值表示;用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)腦片中神經(jīng)細(xì)胞凋亡程度;用透射電鏡觀察細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)是否改變;用蛋白印跡法方法檢測(cè)不同組別Caspase-3蛋白表達(dá)變化。
結(jié)果:⑴不同濃度神經(jīng)生長(zhǎng)因子后處理組與谷氨酸損傷組相比較
3、:損傷組皮層腦片TTC染色A490OD值均降低,LDH釋放率的OD值均增加,流式細(xì)胞術(shù)顯示損傷組細(xì)胞數(shù)均降低,細(xì)胞形態(tài)受損程度和神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)病變均加重;⑵不同藥物濃度后處理保護(hù)組之間比較:發(fā)現(xiàn)明顯差異,Caspase-3蛋白含量隨之變化(P<0.01),其中100μmol/L GNF保護(hù)作用強(qiáng)。
結(jié)論:藥物后處理可使谷氨酸損傷后的新生大鼠皮層腦片的神經(jīng)元細(xì)胞損傷程度減輕,凋亡細(xì)胞的數(shù)量減少,且不同藥物濃度的后處理之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)
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