川芎嗪對谷氨酸損傷海馬神經(jīng)元保護作用的研究.pdf

1、海馬是大腦中非常重要的結構，尤其是對腦的學習記憶功能。海馬的損傷會導致瞬時記憶出現(xiàn)功能障礙，主要影響的是新的記憶形成而對以往的記憶影響不大。大腦缺氧時，海馬是最易受損的器官之一。癲癇主要的病灶也是位于海馬，慢性癲癇發(fā)作可損傷海馬。在阿爾茨海默病、腦炎等疾病中海馬也極易受到損傷。谷氨酸是大腦神經(jīng)元釋放的一種興奮性神經(jīng)遞質，谷氨酸的過多釋放可以引起神經(jīng)元的過度興奮，造成神經(jīng)元損傷或者死亡。腦缺血、阿爾茨海默病、亨廷頓病等疾病的一個共同特點是

2、谷氨酸產(chǎn)生的過度興奮，這可能損傷到海馬神經(jīng)元。中藥是治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病行之有效的方法之一，川芎嗪可以治療某些中樞神經(jīng)疾病如腦缺血，其機制有可能是通過拮抗谷氨酸的興奮性毒性來發(fā)揮作用的，尚需進一步去驗證。因此，本實驗以體外培養(yǎng)海馬神經(jīng)細胞為研究對象，來探討中藥治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病可能的作用和機制。 目的：觀察川芎嗪(Ligustrazine)對谷氨酸(Glu)損傷原代培養(yǎng)海馬神經(jīng)元生長的影響及促進神經(jīng)元功能恢復的保護作用。

3、方法：原代培養(yǎng)新生大鼠海馬神經(jīng)元，通過加入1mmol/L谷氨酸制作神經(jīng)元損傷模型組；培養(yǎng)基中加入10μmol/L的鹽酸川芎嗪溶液共同孵育12h后，加入1mmol/L谷氨酸損傷海馬神經(jīng)元20min，作為川芎嗪保護組。分別觀察各組神經(jīng)元生長過程中形態(tài)變化；采用MTT法檢測細胞活性；測定培養(yǎng)液中乳酸脫氫酶(LDH)活力的變化；細胞免疫組化檢測各組表達乙酰膽堿酯酶(AchE)情況。 結果：川芎嗪能有效的提高原代培養(yǎng)的海馬神經(jīng)元的存活率，

4、其存活率相對對照組提高了28.78％(P<0.01)；川芎嗪的最適宜濃度是10μmol/L。以1mmol/L谷氨酸作用于培養(yǎng)的成熟海馬神經(jīng)元，細胞形態(tài)表現(xiàn)為突起減少，折光性下降；MMT顯示細胞的存活率下降；應用10μmol/L川芎嗪后可改善因谷氨酸引起的神經(jīng)元形態(tài)的改變，可顯著提高谷氨酸損傷后海馬神經(jīng)元的活性(P<0.01)，降低因谷氨酸損傷引起的細胞內LDH的過度釋放(P<0.01)；細胞AchE免疫組化結果：川芎嗪保護組的灰度值明顯

5、低于谷氨酸損傷組(P<0.01)，與正常對照組無顯著性差異(P>0.05)。 結論：(1)川芎嗪對正常培養(yǎng)的海馬神經(jīng)元生長有促進作用，發(fā)現(xiàn)在一定濃度范圍內可明顯提高體外培養(yǎng)神經(jīng)元的存活率，其最佳濃度是10μmol/L。(2)川芎嗪可明顯拮抗谷氨酸興奮性神經(jīng)毒性作用，可改善因谷氨酸引起的細胞死亡，提高細胞的存活率。其可能的機制與川芎嗪可以穩(wěn)定細胞膜，促進細胞膜完整，阻斷谷氨酸的進一步損傷有關。(3)川芎嗪可拮抗因谷氨酸毒性作用引起